【產(chǎn)品名稱】:小鼠25羥基*3(25(OH)D3/25HVD3)免疫組化試劑盒說明書

【英文名稱】:Human hepatocyte growth factor,HGF ELISA kit
【說 明 書】:隨貨發(fā)送，也可直接在線銷售索取
【測試種屬】:犬、大小鼠、人、豚鼠、兔子、牛羊、豬、雞鴨elisa試劑盒等種屬
【檢測目的】:用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
【保存及有效期】2-8℃,避光保存，6個月。
【產(chǎn)品產(chǎn)地】:進口/國產(chǎn)
【產(chǎn)品庫存】:現(xiàn)貨供應(yīng)
【產(chǎn)品規(guī)格】:50T/100T
【品牌】:國產(chǎn)-雅吉生物自主研發(fā)/進口原裝
【產(chǎn)品價格】:*，洽談！
適用于科研實驗、科學(xué)研究等領(lǐng)域，不得用于臨床診斷.
產(chǎn)品特性:
靈敏度:0pg/mL 
檢測范圍:0pg/mL
性價比高:高質(zhì)量，低價格
高效靈活:小鼠25羥基*3(25(OH)D3/25HVD3)免疫組化試劑盒說明書多個樣品可同時分析，靈活確定分析試樣的數(shù)量
特異性強:優(yōu)選高度特異的配對抗體
操作簡單:48孔/96孔預(yù)包被板的完整試劑，實驗時間短.

標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量.
標準品的稀釋：提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘.
終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
檢品溶液的制備：
取大黃粉末2克，加乙醇20ml，在沸水浴上回流浸提10分鐘，過濾供鑒別用。
2．鑒別試驗： 
編號 成 分  包裝組成  GK500705 GK500710 
GK500711 A HRP標記聚合物(抗兔/鼠) 1×5ml 1×10ml 1×100ml 
B DAB緩沖稀釋液 2×6.25ml 2×12.5ml 2×125ml 
C DAB原液 1×0.25ml 1×0.5ml 1×5ml 
配件  塑料吸管 2個 2個 2個 10ml刻度離心管  無  無  1個    
產(chǎn)品簡介：小鼠25羥基*3(25(OH)D3/25HVD3)免疫組化試劑盒說明書是一個特別敏感的二步法免疫組化試劑盒，適合與兔抗抗體或小鼠抗抗體配用。其中試劑A是標記有辣根過氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚體分子，相當(dāng)于二抗，它與兔抗或小鼠抗一抗結(jié)合。結(jié)合后的大分子即標記有辣根過氧化物酶，再與DAB反應(yīng)，得到棕色顯色。由于該系統(tǒng)不含*和鏈親和素，所以不受內(nèi)源型*干擾。染色背景非常清晰。  該系統(tǒng)實驗步驟少，省時；操作簡單，背景低。

產(chǎn)品應(yīng)用： 常規(guī)脫蠟水化：  將石蠟切片浸于二甲苯中5分鐘，三次。取出切片置于100％無水乙醇中3分鐘兩次；依次置入90%－70%各級酒精各3分鐘。用PBS或TBS沖洗3次，每次3分鐘。

石蠟切片免疫組化實驗操作步驟如下：

實驗方法原理    根據(jù)聚合酶技術(shù)把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結(jié)合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結(jié)合后，加入底物顯色。
實驗材料    石蠟切
試劑、試劑盒    PBS檸檬酸鹽緩沖液蒸餾水增強劑酶標抗鼠 兔聚合物蘇木素酒精二甲苯樹膠鹽酸二氨基聯(lián)苯胺
儀器、耗材    烘箱微波盒塑料切片架顯微鏡膠頭滴管
實驗步驟    
1.  石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。
 
2.  取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）
 
3.  每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。
 
4.  除去PBS液，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時。
 
5.  PBS沖洗3×5’。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強劑，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。
 
6.  除去PBS液，每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’。
 
7.  除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘。
 
8.  蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化，自來水沖洗，藍化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。
收起 
    
一、特點

1.  在切片加上一抗后，第二抗體標記多聚螯合物酶（HRP）的復(fù)合物與一抗結(jié)合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信號有顯著的放大，其敏感性較SABC、SP法高。

2.  由于多聚物在體內(nèi)不存在，又不使用*，從而避免了由于*引起的非特異性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。

3.  辣根過氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上，替代傳統(tǒng)方法的 二抗、三抗，減少了實驗步驟，且試劑孵育時間短，只需15分鐘，使得免疫組化方法更簡單，實驗時間比SABC、SP法大為縮短。

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