植物ATP ELISA含量檢測測試盒?品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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植物ATP ELISA含量檢測測試盒實驗測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數=樣品數+9;做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標板加上蓋,37℃反應 90 分鐘。
4.反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應 20-25 分鐘 (注意:顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時藍色立轉黃色。
11.用酶標儀在 450nm 測定 OD值。
有兩種設定空白對照的方案:
(1)將 TMB 空白顯色孔設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去 TMB 空白顯色孔的 吸 光 值 后 , 在 坐 標 紙 上 畫 出 曲 線 , 以 吸 光 值 作 為 縱 坐 標 , 以 濃 度 作 為 橫 坐 標 。
(2)將零孔設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數據可以 直接在坐標紙上畫出曲線。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計樣品待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度 處于 ELISA 試劑盒的檢測范圍。根據待測因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的稀釋方案:
高:指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀釋。297μ ι 樣品稀釋液加 3μ ι 樣品。
中:指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀釋。225μ ι 樣品稀釋液加 25μ ι 樣品。
低:指待測因子在 31.2→2000pg/ml。按 1:2 稀釋。100μ ι 樣品稀釋液加 100μ ι 樣品。
特低:指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋,按每孔 100μ ι 樣品直接加入。
以上方案僅供參考,樣品的稀釋應有詳細記錄。
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