中文名：大分子量* (10)
品 牌：QIAGEN
貨 號：12462
純化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯質粒DNA和非基因組DNA
高效去除基因組DNA污染
轉染級別純度的高分子量DNA
快速簡單的操作
QIAGEN Large-Construct Kit提供重力流和陰離子交換柱，用于純化大分子量的DNA。*的ATP-dependent外切酶消化步驟，確保特異性去除基因組DNA。產物DNA的純度相當于經過兩次CsCl密度梯度離心得到的純度，適用于轉染級別的應用。
特點 | 參數(shù) |
應用 | Subcloning, transfection, sequencing etc. |
起始樣本體積 | <500 ml culture volume |
質粒類型 | BAC, PAC, P1, cosmid DNA |
處理 | Manual (centrifugation) |
每次處理樣本量；通量 | 1 sample per run |
技術 | Anion-exchange technology |
每次運行時間或處理樣本數(shù) | 280 min |
產量 | <150 ug |
性能
使用QIAGEN Large-Construct Kit純化DNA，無基因組DNA的污染（參見Efficient removal of genomic DNA）?；蚪MDNA的去除確保準確可靠的進行DNA定量，使一些敏感實驗可在明確的和可重復的條件下進行。
大分子量*原理
QIAGEN Large-Construct Kit使用經優(yōu)化的重力流操作，獲得的DNA的純度顯著高于其他常規(guī)方法獲得的DNA的純度。*的ATP-dependent外切酶消化步驟，確保特異性去除基因組DNA。
QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹脂專為核酸純化設計。其出色的核酸分離特性可純化得到高純度DNA，相當于經過兩次氯化銫梯度離心得到的純度。預裝的QIAGEN-tips（參見Anion-exchange tips）運用重力沉降原理，減少了質粒制備過程所需的手工操作時間。整個QIAGEN質粒純化系統(tǒng)不使用*、、溴乙錠和氯化銫等有毒物質，zui大程度減小了對使用者及環(huán)境的危害。
操作流程
使用堿裂解法裂解多達500 ml的培養(yǎng)液后（參見QIAGEN Plasmid Kit procedures），使用試劑盒中的ATP-dependent外切酶進行消化，確保特異性去除基因組DNA及缺損的高分子量DNA。之后將樣本上樣至陰離子交換柱，在適當?shù)牡望}濃度和pH值條件下，質粒DNA與樹脂特異性結合。用中等鹽濃度的緩沖液洗滌，去除RNA、蛋白質、代謝物和其他小分子的雜質。用高鹽緩沖液洗脫已去除基因組DNA的純化質粒DNA。加入異丙醇使DNA濃縮和脫鹽，之后離心收集。
應用
QIAGEN Large-Construct Kit純化獲得的DNA適用于各種下游應用，包括：
亞克隆和制備DNA文庫
對高分子量DNA直接進行測序
轉染
