【猴子E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒】

【檢測(cè)范圍】：或者索取說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品用途】：被測(cè)樣品定性量分析

【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T（兩種規(guī)格）

【檢測(cè)方法】：酶免法/酶聯(lián)免疫法（ELISA）

【保存條件】：短期內(nèi)做2-8℃/*保存-20℃

【供 貨 期】：1-3天（現(xiàn)貨供應(yīng)）

【產(chǎn)品性狀】：液體盒裝

【產(chǎn)品價(jià)格】：我們提供ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)一條龍服務(wù)和ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)

【銷售優(yōu)勢(shì)】：價(jià)格優(yōu)勢(shì)、質(zhì)量可靠、如果出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題包退換

【待檢樣本】：體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、等

【產(chǎn)品保質(zhì)期】：半年（六個(gè)月）

【猴子E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒】標(biāo)本的采集及保存 ：
1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000 g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
【猴子E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒】標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 mU/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋200 mU/ml，100 mU/ml，50 mU/ml，25 mU/ml，12.5 mU/ml，6.25 mU/ml，3.12 mU/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 mU/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制100 mU/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）200 mU/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
*標(biāo)記抗體的稀釋原則：
臨用前以*標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl*標(biāo)記抗體加990μl*標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：
臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
【猴子E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒】操作步驟：
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl*標(biāo)記抗體加99μl*標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同*標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
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（注：本試劑只用于科研，歡迎!）
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