Hoechst 33342 *超級(jí)純*

產(chǎn)品描述

Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst 系列染料因與DNA結(jié)合的特性，也常被用來(lái)進(jìn)行線粒體DNA的觀察。Hoechst33258和Hoechst33342是兩種非常相近的Hoechst染料，他們都在紫外段350nm被激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)都為461nm，兩種染料經(jīng)常被用來(lái)替代另一種熒光染料DAPI. Hoechst 33342比33258具有更強(qiáng)的親脂性，因此能更好的透過(guò)完整的細(xì)胞膜，在部分實(shí)驗(yàn)中Hoechst33258的細(xì)胞透過(guò)性存在明顯不足。用于細(xì)胞核染色時(shí)，*的Hoechst 33342工作終濃度為0.5-5μM，在一些敏感性實(shí)驗(yàn)時(shí)，設(shè)置多個(gè)染色濃度，以獲得染色效果。

技術(shù)參數(shù)

光學(xué)性質(zhì)：Ex(nm)：350      Em(nm)：461

化學(xué)參數(shù)：分子量：561.93  溶劑：Water        CAS：23491-52-3

使用方法

1.緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖液制備10～50μM Hoechst 33342染色液。

2.固定的細(xì)胞或組織染色。對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。依次按步驟進(jìn)行免疫熒光染色，和Hoechst33342染色。如果不進(jìn)行免疫熒光染色，則直接按步驟進(jìn)行Hoechst33342染色。

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

b)吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)461nm。

3.活細(xì)胞或組織染色

a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33342染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。

b)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。

c)用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)461nm。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1.  Hoechst 33342溶于水，溶解度可達(dá)20μM(約10mg/ml)。您也可直接購(gòu)買(mǎi)20μM的液體規(guī)格產(chǎn)品（貨號(hào):A5430L2670）。

2.  Hoechst 33342對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

3.  熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

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