天凈沙通用型MLPA試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
天凈沙通用型MLPA試劑盒 | 20次 | 詢價 |
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多重連接依賴探針擴增(Multiplex ligation dependent probe amplication,MLPA),是一種高通量基因檢測技術,它能夠于單一反應管內同時檢測40多個不同的核苷酸序列的拷貝數(shù)變化。該技術已廣泛應用于染色體異常、基因點突變、基因缺失、基因甲基化、癌癥及mRNA表達研究等醫(yī)學基因檢查領域。本公司MLPA試劑盒克服傳統(tǒng)長探針制備復雜、繁瑣的缺點,將長探針分為A段、B段兩部分,分別制備。長探針B段有引物結合區(qū)、長度填充區(qū)和PCR引物結合區(qū)組成,長探針A段(客戶合成)由基因專一區(qū)和上游過橋引物識別區(qū)組成,客戶只需在合成探針時設計一段過橋引物識別區(qū),即可實現(xiàn)快速、高通量基因檢測。該試劑盒具有下列特點:
1. 靈敏度高,特異性強,高通量檢測。
2. 精準度高,重復性強,操作簡便,24小時出結果。
3. 低可檢測ng級DNA或RNA,可適用石蠟包埋和福爾馬林處理等樣品。
4. 應用領域廣,可用于基因組拷貝數(shù)、染色體數(shù)目異常檢測;基因片段缺失與重排分析;腫瘤細胞檢測;基因表達檢測;DNA 甲基化、SNP分析等。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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