名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
秋水仙素溶液 | 1mL | 詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是濃度為10 mg/mL的秋水仙素溶液。秋水仙素(colchicine)是一種生物堿,初從百合科植物秋水仙(Colchicum autumnale)中提取出來,故名,也稱秋水仙堿。其化學(xué)名為(S)-N(5,6,7,9-四氧-1,2,3,10-四氧基-9-氧苯并[α]-庚搭烯-7-基)乙酰胺。CAS號(hào)為64-86-8,分子式為C22H25NO6;分子量為399.44;純秋水仙素呈黃色針狀結(jié)晶,易溶于水、乙醇和,但在熱水中難溶。味苦,有毒。秋水仙素能抑制有絲分裂,破壞紡錘體,使染色體停滯在分裂中期。這種由秋水仙素引起的不正常分裂,稱為秋水仙素有絲分裂(C-mitosis)。在這樣的有絲分裂中,染色體雖然縱裂,但細(xì)胞不分裂,不能形成兩個(gè)子細(xì)胞,因而使細(xì)胞的染色體加倍。經(jīng)過一個(gè)時(shí)期以后,秋水仙素代謝掉,不再起作用,這種染色體數(shù)目加倍了的細(xì)胞再分裂增長(zhǎng)時(shí),就構(gòu)成了雙倍性的細(xì)胞和組織。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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