β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒
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β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒 | 300次 | 詢價(jià) |
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LacZ作為常用的報(bào)告基因之一，是真核基因表達(dá)調(diào)控研究中廣泛使用的參照體系。其蛋白產(chǎn)物β-galactosidase（β-半乳糖苷酶）性質(zhì)穩(wěn)定，活性容易測(cè)定。本試劑盒采用經(jīng)典的ONPG（ο-nitro-phenyl-β-D-galactopyranoβ-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒side）底物成色法，利用β-galactosidase催化無(wú)色的ONPG轉(zhuǎn)變成黃色產(chǎn)物的原理，通過(guò)對(duì)樣品在405～430 nm范圍波長(zhǎng)下的吸光度的測(cè)定，可獲得β-galactosidase的相對(duì)活性。該方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果穩(wěn)定。本試劑盒使用通用裂解緩沖液（Universal Lysis Buffer，ULB），能與其它類型的報(bào)告基因檢測(cè)和蛋白含量檢測(cè)兼容。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1. 操作簡(jiǎn)單：顯色反應(yīng)，適合于高通量篩選
2. 高兼容性：能與其它類型的報(bào)告基因檢測(cè)和蛋白含量檢測(cè)兼容
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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