ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒
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ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒 | 200次 | 詢價(jià) |
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ATP生物發(fā)光技術(shù)的原理是熒光素酶(Luciferase)以熒光素(Luciferin)、三磷酸腺苷(ATP)和O2為底物,在Mg2+存在時(shí),能將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能。ATP既是熒光素酶催化發(fā)光的必需底物,又是所有生物生命活動的能量來源。在熒光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)中,ATP在一定的濃度范圍內(nèi),其濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系。 研究表明,各生長期的細(xì)菌均有較恒定水平的ATP含量,因此,提取細(xì)菌的ATP,利用生物發(fā)光法測出ATP含量后,即可推算出樣品中的含菌量,整個(gè)過程僅為十幾分鐘。由于生物發(fā)光法無需培養(yǎng)微生物過程,操作簡便、靈敏度高,在短時(shí)間內(nèi)即可得到檢測結(jié)果,具有其他微生物檢測方法*的優(yōu)勢,是目前檢測微生物快的方法之一。
本試劑盒采用生物發(fā)光(bioluminescent)法,利用Firefly luciferase(螢火蟲熒光素酶)催化底物L(fēng)uciferin(熒光素)的轉(zhuǎn)化,高效利用ATP的能量,發(fā)射出光子。發(fā)光信號與存在的ATP量呈正比,而ATP與存在于培養(yǎng)基中的細(xì)胞數(shù)目直接呈正比。ATP的檢測靈敏度達(dá)到10-13 mol,故具有*的敏感性。本試劑盒采用優(yōu)化的酶反應(yīng)體系,使發(fā)光反應(yīng)持續(xù)數(shù)十分鐘,便于手工操作多個(gè)樣品。操作簡便,可快速獲得結(jié)果。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下:
1. 高度敏感:靈敏度達(dá)到10-13 mol
2. 快速簡便:加入制劑后迅速獲得結(jié)果
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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