ATP發(fā)光法細胞活力檢測試劑盒

 ATP生物發(fā)光技術的原理是熒光素酶（Luciferase）以熒光素（Luciferin）、三磷酸腺苷（ATP）和O2為底物，在Mg2＋存在時，能將化學能轉化為光能。ATP既是熒光素酶催化發(fā)光的必需底物，又是所有生物生命活動的能量來源。在熒光素酶催化的發(fā)光反應中，ATP在一定的濃度范圍內，其濃度與發(fā)光強度呈線性關系。 研究表明，各生長期的細菌均有較恒定水平的ATP含量，因此，提取細菌的ATP，利用生物發(fā)光法測出ATP含量后，即可推算出樣品中的含菌量，整個過程僅為十幾分鐘。由于生物發(fā)光法無需培養(yǎng)微生物過程，操作簡便、靈敏度高，在短時間內即可得到檢測結果，具有其他微生物檢測方法*的優(yōu)勢，是目前檢測微生物快的方法之一。
    本試劑盒采用生物發(fā)光（bioluminescent）法，利用Firefly luciferase（螢火蟲熒光素酶）催化底物Luciferin（熒光素）的轉化，高效利用ATP的能量，發(fā)射出光子。發(fā)光信號與存在的ATP量呈正比，而ATP與存在于培養(yǎng)基中的細胞數(shù)目直接呈正比。ATP的檢測靈敏度達到10-13 mol，故具有*的敏感性。本試劑盒采用優(yōu)化的酶反應體系，使發(fā)光反應持續(xù)數(shù)十分鐘，便于手工操作多個樣品。操作簡便，可快速獲得結果。該產品特點如下：
1.  高度敏感：靈敏度達到10-13 mol
2.  快速簡便：加入制劑后迅速獲得結果
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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