操作流程:
1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
3洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
6洗板,同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
9洗板,同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12分別測(cè)450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測(cè)得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本s和陰性對(duì)照n的 od值后,計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
Hb人血紅蛋白檢測(cè)試劑盒 | Hb ELISA Kit | 48T/96T | BJ-E2060 |
試劑盒組成及試劑配制:
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行,已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP) 試劑盒 試劑盒 組裝/原裝 11β-Hydroxy-2'-methyl-5'βH-pregna-1,4-dieno[17,16-d]oxazole-3,20-dione 13649-88-2 中文名: 分子式:C23H29NO4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔子葡萄糖氧化酶(GOD) 試劑盒 試劑盒 組裝/原裝 11α-Hydroxycanrenone 中文名: 分子式:C22H28O4 度:98.0%
兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO) 試劑盒 試劑盒 組裝/原裝 11α-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione 564-33-0 中文名:11α-羥基-雄甾-4-烯-3,17-二酮 分子式:C19H26O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔子試劑盒 兔子試劑盒 規(guī)格型號(hào): 兔子試劑盒,規(guī)格型號(hào):,來源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子試劑盒、兔子試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 9-Anthracenecarboxylic acid 中文名:9-蒽甲酸 分子式:C15H10O2 度:98.0%
兔子試劑盒 兔子試劑盒 規(guī)格型號(hào): 兔子試劑盒,規(guī)格型號(hào):,來源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子試劑盒、兔子試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid 中文名: 分子式:C8H10N2O3S 度:98.0%
1-癸烷磺酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-ALKS-10 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜用試劑 人硫轉(zhuǎn)移酶pi基因(GSTpi)檢測(cè)試劑盒HumanglathioneS-ansferases,GSTpi
1-十一烷基磺酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-ALKS-11 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜用試劑 大鼠胰島素原(PI)試劑盒 Rat Proinsulin,PI
1-十二烷基磺酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-ALKS-12 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜用試劑 英文名稱HumanAGRP人Agoi相關(guān)蛋白(AGRP)試劑盒
1-十三烷磺酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-ALKS-13 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜用試劑 糞便DNA分離+高質(zhì)化試劑盒50
十二烷基硫酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-SDS 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜用試劑 KiAG-1人重組激活基因1規(guī)格:48T/96T
十五氟辛酸(約5mmol)[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-PFFA-8 (ca. 5mmol) 質(zhì)量規(guī)格:用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對(duì)試劑 小鼠母系胚胎亮酸拉鏈蛋白(MELK)試劑盒 ,英文名: MELK
十五氟辛酸,高等級(jí)[離子對(duì)色譜級(jí)] IPC-PFFA-8 HG 質(zhì)量規(guī)格:用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對(duì)試劑 人花生四烯酸(AA)檢測(cè)試劑盒HumanArachidonicAcid,AA
9,10-二甲氧基蒽-2-磺酸鈉鹽[離子對(duì)色譜級(jí)] IPA-DAS 質(zhì)量規(guī)格:用于氨類的熒光離子對(duì)試劑 大鼠胰島素樣因子3(INSL3)試劑盒 Rat Insulin-Like 3,INSL3
敵草隆(標(biāo)準(zhǔn)品) Diuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5% 英文名稱Human8-iso-ProstaglandinF2a人8-異前列腺素F2α(8-ISOPGF2a)
茜素紅 Alizarin red 質(zhì)量規(guī)格:AR 糞便DNA分離試劑盒50
魚腎上腺髓質(zhì)素(ADM)elisa分析檢測(cè)試劑盒
Hb人血紅蛋白檢測(cè)試劑盒小鼠骨特性堿性磷酸酶C端肽elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠骨特性堿性磷酸酶C端肽elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠骨橋素(OPN)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
注:本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他Elisa試劑盒請(qǐng)咨詢銷售人員。產(chǎn)品僅用于科研