生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
中文名稱：T4連接酶
英文名稱：T4 DNA ligase
產(chǎn)品規(guī)格：100U
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0164560
產(chǎn)品介紹：
本T4 DNA Ligase是從表達(dá)T4 DNA Ligase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化而來的，催化相鄰DNA鏈的5’磷酸基團(tuán)和3’羥基基團(tuán)以磷酸二酯鍵結(jié)合反應(yīng)。該酶可催化平末端或粘性末端DNA之間的連接，還可修復(fù)雙鏈DNA、RNA、DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切口。本品可應(yīng)用于DNA插入片段和載體DNA的粘性末端和平末端的連接，以及線性DNA的自身環(huán)化。 產(chǎn)品組分： T4 DNA ligase (5U/μl)————————100 U (20μl) 10×T4 DNA Ligation Buffer——————0.2 ml 50%PEG Solution————————————0.15 ml 活性定義：此酶的活力單位為Weiss Unit。1個(gè)Weiss Unit相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1個(gè)CEU單位定義為在20μl的連接反應(yīng)體系中，在16℃30分鐘內(nèi)，能使50%的經(jīng)HindIII消化的λDNA片段連接所需的酶量。 注意事項(xiàng)： 1、T4 DNA Ligase的終用量不要過推薦的用量，否則影響連接效率。 2、PEG可以極大提高平末端的連接效率，我們推薦加入終濃度為5% PEG Solution以提高平末端的連接效率。 3、為了提高轉(zhuǎn)化效率，轉(zhuǎn)化時(shí)建議所加入連接產(chǎn)物的量不要過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%。 4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比較粘稠容易掛壁，建議使用前短暫離心將液體收集到管底，取樣時(shí)槍頭盡量不要深入液面太深以免粘在槍頭上造成損失。 儲(chǔ)存條件：-20℃。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
PROTEASE酶解法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒
物理法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒
簡(jiǎn)易化學(xué)法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒
鹽酸化學(xué)法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒
甲酸化學(xué)法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒
小鼠夏科雷登氏結(jié)晶蛋白(CLC)elisa ，英文名： CLC ELISA Kit
兔熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit 96T/48T
牛胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒 Bovine Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit
英文名稱HumanPhosphoinositide-3kinaseELISAKit人0脂酰肌醇三羥基(PI3K)規(guī)格：96T/48T
蛋類羥比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Ratneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALelisa大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)elisa規(guī)格：96T/48T
T4連接酶小鼠可溶性CD40配體（sCD40 L）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠可溶性CD30(sCD30)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠顆粒體蛋白(GRN)elisa檢測(cè)試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
