細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
下列是產(chǎn)品的訂購信息：
產(chǎn)品名稱 | RN-c細胞，大鼠皮層神經(jīng)元細胞供應(yīng)商 |
英文名稱 | RN-c cells, cortical neurons of rats |
貨號 | EY-X64237 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
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培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
黑曲霉 Aspergillus niger大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
中國臺灣根霉 Rhizopus formosensis大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
U-937(人組織細胞淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2
大鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基LLC-WRC 256(大鼠腹水細胞)
人腦動脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
人軟骨細胞*培養(yǎng)基100mL
熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
小鼠白血病細胞G-CSF依賴性NFS-60
CT26.WT(小鼠結(jié)腸細胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
A-427(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
RN-c細胞，大鼠皮層神經(jīng)元細胞供應(yīng)商人干擾素誘導(dǎo)蛋白10IP-10/CXCL10(Human interferon-inducible protein 10) ELISA Kit 96T
小鼠嗜酸粒細胞趨化因子MECF(ouse eosinophil chemotactic factor) ELISA Kit 96T
大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶ADAMTS13/vWF-cp ELISA Kit 96T
人白介素1IL-1(Human Interleukin 1) ELISA Kit 96T
大鼠血管生成素4ANG-4 ELISA Kit 96T
人白介素17IL-17(Human Interleukin 17) ELISA Kit 96T
小鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 96T
大鼠脂多糖結(jié)合蛋白LBP ELISA Kit 96T
小鼠E選擇素E-Selectin/CD62E(Mouse E-Selectin) ELISA kit 96T
小鼠凋亡相關(guān)因子FAS/CD95(Mouse Factor-related Apoptosis) ELISA Kit 96T
大鼠乙醇脫氫酶ADH ELISA Kit 96T
