ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀(guān)察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀(guān)察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
產(chǎn)品名稱(chēng):豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Porcine Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào):EY-E96395
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品保存:2-8℃,有效期6個(gè)月
主要組成成分:試劑
性狀:液體
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
96T指可以做94個(gè)標(biāo)本,2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照
48T指可以做47個(gè)標(biāo)本,1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照
96T-84個(gè)樣本
48T-42個(gè)樣本
待檢樣本:體液,血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等。
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樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
注意事項(xiàng)
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9)按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
酸棗仁皂苷A CAS 55466-04-1 規(guī)格:20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
香葉木苷;地奧斯明 CAS 規(guī)格:HPLC≥98%,20mg/支 訂購(gòu)|咨詢(xún)
木犀草素-5-O-葡萄糖苷;Luteol CAS 20344-46-1 規(guī)格:20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
亥茅酚苷 CAS 80681-44-3 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
白綿馬素AA CAS 3570-40-9 規(guī)格:10mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
新對(duì)葉百部堿 CAS 143120-46-1 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
灰氈毛忍冬皂苷乙;Macranthoid CAS 136849-88-2 規(guī)格:20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
歐當(dāng)歸內(nèi)酯A CAS 591-12-8 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
小檗堿 CAS 2086-83-1 規(guī)格:20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
紅豆蔻 CAS 規(guī)格:1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
絞股藍(lán)皂苷XLIX;Gypeside CAS 94987-08-3 規(guī)格:20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA檢測(cè)試劑盒 FRMD7蛋白抗體 英文名稱(chēng):FRMD7 0.2ml
FRMD4A蛋白抗體 英文名稱(chēng):FRMD4A 0.2ml
延胡索酰乙酰水解酶抗體 英文名稱(chēng):FAHD2A 0.2ml
FAM101A蛋白抗體 英文名稱(chēng):FAM101A 0.2ml
FAM102B蛋白抗體 英文名稱(chēng):FAM102B 0.2ml
腎細(xì)胞癌下調(diào)蛋白1抗體 英文名稱(chēng):FAM107A 0.2ml
FAM104B蛋白抗體 英文名稱(chēng):FAM104B 0.2ml
8/第八/第八因子相關(guān)抗原抗體 英文名稱(chēng):Factor VIII 0.1ml
胎盤(pán)受體蛋白2抗體 英文名稱(chēng):FOLR2 0.1ml
FAM13B1蛋白抗體 英文名稱(chēng):FAM13B1 0.2ml
巖藻糖轉(zhuǎn)移酶8抗體 英文名稱(chēng):FUT8 0.2ml