產(chǎn)品名稱:Malme-3M人惡性黑色素瘤細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6個(gè)細(xì)胞/T25
凍存條件:無(wú)血清細(xì)胞凍存液
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。
溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
傳代方法 1:2~1:4傳代
傳代情況： 2天換液
細(xì)胞描述：收集瓶子中培養(yǎng)基留作過(guò)渡培養(yǎng)

細(xì)胞株的交叉污染和錯(cuò)誤辨識(shí)已為生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和產(chǎn)業(yè)發(fā)展帶來(lái)研究結(jié)論錯(cuò)誤、結(jié)果不可重復(fù)、雜志撤稿、臨床細(xì)胞治療失敗等重大危害。因此NIH等機(jī)構(gòu)已經(jīng)將細(xì)胞鑒定作為基金申請(qǐng)的前提條件，而Science、Nature、Cell等著名期刊也明確要求必須對(duì)投稿文章中所用的人源細(xì)胞做身份鑒定。
   
     STR（Short Tandem Repeat，短串聯(lián)重復(fù)序列）是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列，由于其核心序列重復(fù)次數(shù)存在個(gè)體差異多態(tài)性，因此STR也被稱為細(xì)胞的DNA指紋。2011年美國(guó)頒布了細(xì)胞STR鑒定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（ANSI/ATCC ASN-0002-2011）。目前STR檢測(cè)已被廣泛應(yīng)用于親子鑒定、個(gè)體識(shí)別、細(xì)胞來(lái)源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等細(xì)胞庫(kù)已將STR基因分型列為細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件：電詢
二、細(xì)胞收到后處理
在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)暮棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml*培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

售后服務(wù)告知書

一、收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行售后的依據(jù)。

2. 收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)重發(fā)一次細(xì)胞。

3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后與客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4. 如客戶對(duì)細(xì)胞的種類、純度、活性等特性有疑問(wèn)，需提供相應(yīng)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果作為依據(jù)。

細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開(kāi)封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

注意：若對(duì)細(xì)胞鑒定存在爭(zhēng)議，可以在收到細(xì)胞3個(gè)月內(nèi)提供真實(shí)有效的STR檢測(cè)證明，本公司承諾無(wú)條件退還細(xì)胞款項(xiàng)，其他情況本公司將不予受理。

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