Cell Meter™檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞生存力的工具?？梢允褂枚喾N參數(shù)。該特定試劑盒旨在監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡，壞死和健康細(xì)胞。凋亡被描述為一種主動(dòng)的，程序性的自動(dòng)細(xì)胞拆卸過程，可避免引起炎癥。在細(xì)胞凋亡中，磷脂酰siansuan（PS）被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。作為細(xì)胞凋亡初始/中間階段的通用指標(biāo)，在觀察形態(tài)變化之前可以檢測(cè)到磷脂酰siansuan在細(xì)胞表面的出現(xiàn)。該試劑盒中使用的PS傳感器與膜PS結(jié)合后具有綠色熒光。壞死的特征是被動(dòng)的 環(huán)境擾動(dòng)導(dǎo)致炎癥細(xì)胞內(nèi)容物不受控制釋放而導(dǎo)致意外細(xì)胞死亡。膜不透性7-AAD（Ex / Em = 546/647 nm）標(biāo)記核的能力證明，質(zhì)膜完整性的喪失代表了晚期凋亡和壞死的簡(jiǎn)單方法。此外，該試劑盒還提供了活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記染料CytoCalcein™Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于標(biāo)記活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可通過流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡（綠色），壞死（綠色和/或紅色）和健康細(xì)胞（藍(lán)色）。代表了證明晚期細(xì)胞凋亡和壞死的簡(jiǎn)單方法。此外，該試劑盒還提供了活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記染料CytoCalcein™Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于標(biāo)記活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可通過流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡（綠色），壞死（綠色和/或紅色）和健康細(xì)胞（藍(lán)色）。代表了證明晚期細(xì)胞凋亡和壞死的簡(jiǎn)單方法。此外，該試劑盒還提供了活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)標(biāo)記染料CytoCalcein™Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于標(biāo)記活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可通過流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡（綠色），壞死（綠色和/或紅色）和健康細(xì)胞（藍(lán)色）。
| 流式細(xì)胞儀 | |
| 激發(fā) | 405 nm，488 nm激光 |
| 發(fā)射 | 450/40 nm，530/30 nm，670/14 nm濾光片 |
| 儀器規(guī)格 | 太平洋藍(lán)，F(xiàn)ITC，PE-Cy5頻道 |
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | DAPI，F(xiàn)ITC，德克薩斯紅過濾器 |
| 發(fā)射 | DAPI，F(xiàn)ITC，德克薩斯紅過濾器 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 組分A：100X Apopxin™綠色 | 1小瓶（200 µL） |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
| 分量C：200X 7-AAD | 1小瓶（100 µL） |
| 成分D：CytoCalcein™紫羅蘭色450 | 1小瓶（凍干粉） |
用測(cè)試化合物制備細(xì)胞（200 µL /樣品）
添加Apopxin™Green檢測(cè)溶液
在室溫下孵育30-60分鐘
使用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析，流式細(xì)胞儀帶有發(fā)射濾光片530/30 nm（對(duì)于凋亡細(xì)胞為FITC通道），450/40 nm（對(duì)于健康細(xì)胞為Pacific Blue通道）和670/14 nm（對(duì)于壞死細(xì)胞為PE-Cy5通道）
重要說明
開始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，制備后應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. CytoCalcein™紫羅蘭色450儲(chǔ)備液（200X）：
在CytoCalcein™紫羅蘭色450（成分D）小瓶中加入100 µL DMSO，制成200X CytoCalcein™紫羅蘭色450儲(chǔ)備液。避光。
程序
用Apopxin™Green準(zhǔn)備和孵育細(xì)胞：
用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間（對(duì)于用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞為4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)凋亡。
離心細(xì)胞以獲得1-5×10 5細(xì)胞/管。
將細(xì)胞重懸于200 µL分析緩沖液（組分B）中。
向細(xì)胞中加入2 µL 100X Apopxin™Green（組分A）。
可選1：向壞死細(xì)胞的細(xì)胞中加入1 µL 200X 7-AAD（組分C）。
可選2： 然后向細(xì)胞中加入1 µL 200X CytoCalcein™Violet 450儲(chǔ)備液，以進(jìn)行健康細(xì)胞染色。
避光保存，在室溫下孵育30至60分鐘。
在使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞之前，添加300 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。
使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度，該流式細(xì)胞儀帶有發(fā)射濾光片530/30 nm（對(duì)于凋亡細(xì)胞為FITC通道），450/40 nm（對(duì)于健康細(xì)胞為Pacific Blue通道）和670/14 nm（PE-Cy5通道-壞死細(xì)胞）細(xì)胞）。
使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞：
使用流式細(xì)胞儀，用發(fā)射濾光片530/30 nm（針對(duì)凋亡細(xì)胞的FITC通道），450/40 nm（對(duì)于健康細(xì)胞的Pacific Blue通道）和670/14 nm（對(duì)于PE-Cy5通道，針對(duì)Apopxin™Green結(jié)合）進(jìn)行定量壞死細(xì)胞）。 注意： Apopxin™與貼壁細(xì)胞結(jié)合的流式細(xì)胞儀分析未經(jīng)過常規(guī)測(cè)試，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲過程中可能會(huì)發(fā)生特定的膜損傷。然而，Casiola-Rosen等人先前已經(jīng)報(bào)道了利用膜聯(lián)蛋白V在貼壁細(xì)胞類型上進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法。和van Engelend等。
使用熒光顯微鏡分析細(xì)胞：
孵育后用移液管吸移細(xì)胞懸液，用測(cè)定緩沖液沖洗1-2次，然后用測(cè)定緩沖液重懸細(xì)胞。
將細(xì)胞添加到載有玻璃蓋玻片或黑色墻壁/透明底部96孔微孔板的載玻片上。 注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，建議直接在蓋玻片（或黑色墻壁/透明底部96孔微孔板）上生長(zhǎng)細(xì)胞。與Apopxin™Green孵育后，用Assay Buffer沖洗1-2次，然后將Assay Buffer加回到蓋玻片（或黑色的壁/透明的底部96孔微孔板）中。將玻片上的蓋玻片倒置并可視化細(xì)胞。與Apopxin™Green孵育后，還可以將細(xì)胞固定在2％甲醛中，并在顯微鏡下觀察。
使用FITC濾光片在熒光顯微鏡下用Apopxin™Green分析凋亡細(xì)胞。當(dāng)添加7-AAD時(shí)，使用Texas Red過濾器測(cè)量細(xì)胞活力，和/或當(dāng)將CytoCalcein™Violet 450添加到細(xì)胞中時(shí)，使用DAPI或Violet過濾器測(cè)量細(xì)胞活力。質(zhì)膜上的綠色染色表明Apopxin™Green與細(xì)胞表面的PS結(jié)合。
22846 Cell Meter™細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死檢測(cè)試劑盒 *三色熒光* Cell Meter™ Multiplexing Live, Apoptotic and Necrotic Cell Detection Kit III *Triple Fluorescence Colors* 100 Tests 22849 Cell Meter™TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒*綠色熒光* Cell Meter™ TUNEL Apoptosis Assay Kit *Green Fluorescence* 50 Tests
