產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

ER-Tracker探針是一系列具有細胞膜透過性，對活細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對細胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細胞染色后用醛固定，可以部分保留活細胞的染色特征。

本品為ER-Tracker Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，藍色熒光，屬于DapoxylTM（DPX）家族成員之一。DPX系列染料均具有長發(fā)射波長、高吸光系數(shù)、高量子產(chǎn)量、較大斯托克司頻移等特點。但這些染料具有環(huán)境敏感性，會隨之出現(xiàn)極性增強、zui大熒光波長偏移到更高波長處、量子產(chǎn)量下降等現(xiàn)象。

本品為溶于DMSO的1mM ER-Tracker Blue-White DPX儲存液，推薦工作濃度為100nM-1μM。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式（Formula）：C26H21F5N4O4S

分子量（Molecular Weight）：580.53

外觀（Appearance）：Yellow Solution

Ex/Em：374/430-640nm

濾片（Filter）：DAPI or UV longpass

步驟說明

本實驗方案經(jīng)牛肺動脈內(nèi)皮細胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細胞系驗證。但不同的細胞類型其*使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進行進一步優(yōu)化。

1. 試劑準備

使用前將ER-Tracker Blue-White DPX 回溫至室溫，并簡短離心使該DMSO溶液至管底。

2.  細胞樣品處理及染色

2.1 將1mM ER-Tracker Blue-White DPX儲存液按照實驗要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度100nM-1µM。建議在不影響實驗結(jié)果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過高染色導(dǎo)致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s （HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進行染色，可得到*實驗結(jié)果。

2.2 染色

對于貼壁細胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細胞，加入預(yù)熱的染料工作液于37℃孵育細胞15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。【注】：由于ER-Tracker Blue-White DPX探針具有較高光敏感性，會產(chǎn)生波動較大的發(fā)射吸收峰值，使用長通DAPI濾光片效果。 另，操作過程中需盡量避光。

細胞如需固定，請參考以下步驟。

3． 細胞固定及透化處理

3.1 固定細胞：用4%甲醛于37℃固定細胞10-20min。

【注】：已染色細胞用醛固定后，僅部分ER-Tracker Blue-White DPX留在細胞內(nèi)，熒光信號會有部分衰減。

3.2 （可選）透化處理：若細胞還需進行后續(xù)染色，需對細胞利用0.2% TritonX-100 透化10min。

3.3 清洗觀察細胞：細胞固定后，可用合適緩沖液進行清洗，每次5min，共2次。鏡檢即可。

注意事項

1）不能儲存在無霜冰箱，建議按照單次用量分裝于-20℃凍存。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。

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