pcr儀溫度校準(zhǔn)裝置、基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置

PCR儀自動(dòng)檢定 PCR儀溫度檢定系統(tǒng)、PCR儀自動(dòng)檢定 PCR儀溫度檢定系統(tǒng)

基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范

一、 引言

PCR是聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction)的簡(jiǎn)稱，是在短時(shí)間內(nèi)體外大量擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。自動(dòng)完成聚合酶鏈反應(yīng)，提供DNA 擴(kuò)增的溫度條件而設(shè)計(jì)的儀器稱為PCR儀。

PCR儀主要用于DNA片段的放大，可將DNA分子或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍，在這過(guò)程中主要是3個(gè)特征溫度循環(huán)：

1． 高溫變性：把樣品加熱至90～95℃讓DNA模板變性變成單鏈。

2． 低溫退火：讓樣品的溫度迅速下降至50～65℃,引物就可以結(jié)合到模板上去。

3． 適溫延伸：讓樣品的溫度上升至70～75℃,DNA聚合酶就可以從引物開(kāi)始用底物復(fù)制出新鏈。

因此，在PCR反應(yīng)過(guò)程中對(duì)溫度控制的要求很高，良好的溫度控制是PCR儀質(zhì)量好壞的關(guān)鍵。

二、PCR基因擴(kuò)增儀校準(zhǔn)的現(xiàn)狀

PCR儀的控溫精度、升降溫速率以及溫場(chǎng)的均勻性等直接影響DNA片段擴(kuò)增的結(jié)果。PCR儀經(jīng)使用后，其溫度傳感器的計(jì)量特性會(huì)發(fā)生變化，作為計(jì)量設(shè)備一般須經(jīng)定期校準(zhǔn)后方能繼續(xù)使用。

幾乎進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室（如基因判別、親子鑒定、DNA個(gè)體識(shí)別）都會(huì)使用多臺(tái)擴(kuò)增儀以滿足實(shí)驗(yàn)需求。而且，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的基因擴(kuò)增儀都是常開(kāi)常用，使用頻率高，很難保證其性能指標(biāo)符合實(shí)驗(yàn)要求。各實(shí)驗(yàn)室對(duì)PCR儀的質(zhì)量控制還停留在自檢自校和依賴于廠商的售后支持。

三、 PCR儀溫度校準(zhǔn)的項(xiàng)目及必要性

一個(gè)穩(wěn)定的溫度循環(huán)是成功實(shí)現(xiàn)PCR所必需的。其中溫度控制的動(dòng)、穩(wěn)態(tài)特性是影響PCR擴(kuò)增結(jié)果正確與否的最重要因素之一, 這包括溫度準(zhǔn)確性、升降溫速度、溫場(chǎng)均勻性、（一）、溫度準(zhǔn)確性

溫度準(zhǔn)確性是PCR儀最重要的性能指標(biāo)，如溫度準(zhǔn)確性低可直接造成非特異性擴(kuò)增，甚至是錯(cuò)誤的擴(kuò)增結(jié)果，造成假陽(yáng)性和假陰性。

市場(chǎng)上各家廠商考核基因擴(kuò)增儀（PCR儀）性能的主要指標(biāo)，一般廠家的企業(yè)指標(biāo)為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度準(zhǔn)確度為±0.3℃。故需對(duì)PCR儀控溫準(zhǔn)確度進(jìn)行測(cè)試。

校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)平均溫度的計(jì)算公式為：I—參加檢測(cè)的溫度探頭序號(hào)；n—參加檢測(cè)的溫度探頭的數(shù)量

（二）、溫場(chǎng)均勻性

由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導(dǎo)致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗(yàn)結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標(biāo)。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。

校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過(guò)選取孔板中16個(gè)特殊反應(yīng)位置來(lái)測(cè)量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個(gè)探頭在同一時(shí)刻溫度與最小溫度的差值。均勻度計(jì)算公式為：tmax-tmin  （tmax =溫度；tmin =最小溫度）

（三）、升降溫速率

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量的多少?zèng)Q定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預(yù)設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力（）。一個(gè)完整的PCR過(guò)程，是由若干個(gè)升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因?yàn)椤白冃浴?，“退火”和“延伸?個(gè)階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過(guò)程盡可能地迅速，才能縮短每個(gè)PCR循環(huán)以及整個(gè)PCR 過(guò)程所需時(shí)間。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。

儀器校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。

四、解決方案

根據(jù)基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范的要求，我們公司推出了pcr儀溫度校準(zhǔn)裝置、基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置來(lái)校準(zhǔn)pcr儀。

具體方案 精密測(cè)溫儀+恒溫槽+標(biāo)準(zhǔn)熱敏電阻

PCR儀自動(dòng)檢定 PCR儀溫度檢定系統(tǒng)