WB實驗代測
免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
Western blotting服務實驗流程
u 細胞及組織蛋白質(zhì)抽提;
u 蛋白質(zhì)定量;
u 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE);
u 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜;
u 膜的封閉;
u 一抗、二抗孵育;
u 結(jié)果檢測:化學發(fā)光法檢測,X 膠片曝光顯影;
u 數(shù)據(jù)分析;
代測說明:
1、有趨勢,不需做預實驗。
2、沒有趨勢,要求做預實驗。
3、WB檢測里包含了蛋白提取。
4、實驗結(jié)束,返還膠圖。
5、一個指標只能跑一張膜
WB實驗代測的優(yōu)勢:
1、western免疫印跡是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。