ReadiPrep 核/細(xì)胞質(zhì)分離試劑盒 可逐步分離哺乳動物細(xì)胞或組織中的核和細(xì)胞質(zhì)提取物。 分離的蛋白質(zhì)具有高濃度并保留其生物學(xué)活性。 該試劑盒的核和細(xì)胞質(zhì)提取物與許多下游應(yīng)用兼容,包括酶活性測定和熒光Western印跡等。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的ReadiPrep 核/細(xì)胞質(zhì)分離試劑盒。
樣品實驗方案
簡要概述
用PBS沖洗細(xì)胞
加入500 µL細(xì)胞質(zhì)提取緩沖液
離心20秒
收集上清液(細(xì)胞質(zhì)提取物)
將沉淀重新懸浮在150 µL 1X高鹽緩沖液中
離心20分鐘
收集上清液(核提取物)
溶液配制
工作溶液配制
1.細(xì)胞液提取緩沖液(1X):將100 µL的10X蛋白酶抑制劑(組分C)和1 µL的DTT(組分D)添加到0.9 mL的細(xì)胞質(zhì)提取緩沖液(組分A)中。
2.核提取緩沖液(1X):將100 µL 10X蛋白酶抑制劑(組分C)和1 µL DTT(組分D)添加到0.9 mL核提取緩沖液(組分B)中。
注意:0.5 mL 1X細(xì)胞質(zhì)提取緩沖液和150 µL 1X核提取緩沖液足以進(jìn)行1次測定,并根據(jù)需要準(zhǔn)備新鮮的緩沖液。
實驗步驟
1.用冷PBS沖洗細(xì)胞1次。 對于懸浮的細(xì)胞,請通過離心收集細(xì)胞。
2.向細(xì)胞中加入500 µL 1X Cytosol提取緩沖液。 對于貼壁細(xì)胞,將貼壁細(xì)胞刮入1.5 mL離心管中。
3.劇烈渦旋以全部重懸細(xì)胞。
4.以16,000 g離心1-2分鐘,然后將上清液(細(xì)胞質(zhì)提取物)轉(zhuǎn)移到另一個干凈的試管中。 將試管放在冰上以備下游使用或在-80°C下保存。
5.將沉淀重懸于150 µL 1X核提取緩沖液中。
6.劇烈渦旋以全部重懸沉淀。
7.將試管在4°C旋轉(zhuǎn)30分鐘。
8.以16,000g離心20分鐘,然后將上清液(核提取物)轉(zhuǎn)移到另一個干凈的試管中。 將試管放在冰上以備下游使用或在-80°C下保存。