全自動細胞計數(shù)儀核心設(shè)計理念與主要特點,具體如下:
- 采用*的圖像分析方法(區(qū)別于傳統(tǒng)的庫爾特計數(shù)原理,如Millipore的Scepter),計數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定;
- 多維自動聚焦技術(shù);
- 哺乳動物細胞總數(shù)及活細胞計數(shù);
- 一步操作,30秒內(nèi)實現(xiàn)真正的全自動細胞計數(shù)。
全自動細胞計數(shù)儀技術(shù)參數(shù):
| |
計數(shù)時間 | 30秒 |
細胞濃度范圍 | 5x104–1x107cells/ml |
樣品體積 | 10 μl |
細胞直徑范圍 | 6~50微米 |
數(shù)據(jù)儲存 | 100個數(shù)據(jù) |
數(shù)據(jù)輸出 | USB flash drive (USB port A) |
打印機兼容性 | USB port A or B |
內(nèi)置稀釋度計算器 | 有 |
細胞圖像查看功能 | 有 |
體積 (w/d/h) | 19 x 16 x 25.4m (7.5 x 6 x 10") |
重量 | 2.2 kg (不含外接電源) |
另外,之前用于TC10的耗材與外圍設(shè)備與TC20兼容,產(chǎn)品名稱與貨號也與原來保持*:Counting kit (包含slides與trypan blue),Counting slides,Trypan blue dye, Thermal label printer & labels和Verification kit。
雖然TC20在外觀上與TC10幾乎一模一樣,但由于采用了全新的鏡頭以及更加強大的分析算法,相比TC10在性能上有了如下主要的提升:
- TC20活細胞計數(shù)直徑范圍:6~50微米,而TC10活細胞計數(shù)直徑范圍:10~50微米。可對干細胞、從血液、組織等獲得的各種原代細胞如淋巴細胞、外周血單個核細胞(PBMCs)等進行準(zhǔn)確地計數(shù),這是TC10無法實現(xiàn)的
- 細胞直徑分選功能:在處理諸如原代細胞等復(fù)雜樣品時,可通過設(shè)定細胞直徑范圍對目標(biāo)細胞進行計數(shù)
- PC應(yīng)用軟件——TC20 Data Analyzer,用戶可將原始計數(shù)數(shù)據(jù)從TC20上導(dǎo)出,并在PC機上利用TC20 Data Analyzer軟件進行后續(xù)分析。該軟件可從Bio-Rad網(wǎng)站上免費下載
- 用戶可對每個樣品獨立命名,進行大量樣品計數(shù)時,也可采用自動命名工具節(jié)省時間
- 可自動將原始數(shù)據(jù)導(dǎo)出到U盤,其中包含柱狀圖、樣品名稱等信息
TC20新功能 | |
活細胞/總細胞直徑范圍 | 6~50微米 |
細胞直徑分選功能 | 有 |
PC可選分析軟件 | 有,TC20 Data Analyzer |
數(shù)據(jù)自動導(dǎo)入USB | 有 |
樣品命名 | 有 |
TC20有2種計數(shù)模式:一種是和TC10一樣的全自動模式;另一種就是直徑分選功能,該功能可實現(xiàn)對細胞進行有選擇性的計數(shù)。可根據(jù)用戶輸入的細胞直徑范圍對該大小范圍內(nèi)的細胞進行計數(shù)。該模式特別適用于對含有多種細胞類型的復(fù)雜樣品進行計數(shù)、分析,如干細胞、原代細胞等。
如要使用細胞直徑分選功能,必須激活User defined gates選項。激活該選項后,會在計數(shù)前顯示柱狀圖,隨后輸入細胞直徑的范圍。TC20只會對設(shè)定范圍大小內(nèi)的細胞進行分析,大小范圍超出設(shè)定范圍的細胞則不被分析。如上圖示。
TC20可保存之前設(shè)定的細胞直徑范圍,用于后續(xù)的實驗。
用戶還可激活圖像預(yù)覽功能,在設(shè)定直徑范圍內(nèi)的細胞在預(yù)覽圖上顯示為黃色。當(dāng)調(diào)整直徑范圍大小時,預(yù)覽圖會隨設(shè)置的不同進行更新。
如果對一種全新的細胞種類進行計數(shù),可將直徑范圍設(shè)置在大值,在PC上利用TC20 Data Analyzer進行后續(xù)分析,確定該細胞種類*的計數(shù)直徑范圍。如下圖。
如果沒有激活細胞直徑分選功能,那么TC20采用默認(rèn)的方式對所有細胞進行計數(shù)。得到的計數(shù)結(jié)果有可能反映了樣品中數(shù)量多的那種細胞,而非用戶真正想研究的細胞類型。
根據(jù)細胞計數(shù)在整個技術(shù)路線中的應(yīng)用,大致包括如下方向:
- 誘導(dǎo)多功能干細胞(iPS or iPSC)與人胚胎干細胞(hESC)的相關(guān)研究
- 外周血單個核細胞(PBMCs)計數(shù),因為PBMC往往小于10微米
- 原代細胞計數(shù)。原代細胞往往來源于組織,種類多樣,如脂肪細胞、肝細胞、角質(zhì)形成細胞和心肌細胞等
- 細胞培養(yǎng)中確定培養(yǎng)細胞的濃度
- 在流式細胞前確定細胞濃度,若濃度過高會導(dǎo)致流式細胞儀的堵塞
- 毒理學(xué)研究——對細胞進行一定條件的理化刺激前后進行總細胞/活細胞的計數(shù),評估刺激條件的效果
- 病毒學(xué)研究——通過對感染細胞的計數(shù)分析評估病毒的感染強度