公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

NHS-Activated Magnetic Beads 是均勻的，表面覆蓋有高密度NHS（N-羥基琥珀 酰亞胺） 官能團的磁珠。磁珠通過形成穩(wěn)定的酰胺鍵方式，快速、高效的共價結(jié)合任何含有伯胺的配 體(圖 1）。本款磁珠可以在偶聯(lián)條件下快速完成反應(yīng)（室溫 pH 6.5-9 下 15-30 分 鐘，4℃ 下 4 小時），且不需要危險化學(xué)品。 NHS-activated Magnetic Beads 適于結(jié)合大分子蛋白。 Long-arm NHS-activated Magnetic Beads 被推薦用于結(jié)合小肽分子， 因為其長臂（21-原子） 的親水連接基團可以減少位阻現(xiàn)象。 NHS-activated Magnetic Beads 可以地作為親和樹脂進行親和純化，將分子、 細胞和 部分細胞提取物進行提煉純化。在與配體結(jié)合后，將磁珠添加到含有目標(biāo)分子的樣品中，然 后混合、孵育、洗滌和洗脫目標(biāo)分子（圖2）。

產(chǎn)品特點及優(yōu)勢：

·預(yù)活化即用型磁珠

·便于使用

·在pH7.4，4℃-25℃條件下可以快速偶聯(lián)

·穩(wěn)定的共價鍵，低水平的配體泄漏

·可重復(fù)使用的免疫親和基質(zhì)

·極低的非特異性結(jié)合率

·用途：用于純化抗體，蛋白質(zhì)/肽，DNA / RNA;細胞篩選、免疫沉淀

操作步驟

提示：

強烈建議在實驗過程中進行滴定優(yōu)化，以確定每個實驗中應(yīng)用的磁珠數(shù)量。該協(xié)議可以相應(yīng)地放大和縮小。避免使用含有 tris 或其他含有伯胺類試劑的緩沖液，因為它們與預(yù)期的偶聯(lián)反應(yīng)競爭。

1.將適量的珠子轉(zhuǎn)移到離心管中。將管放在磁力分離器上 1-3 分鐘。當(dāng)磁珠沉淀時， 去除上清液。 

2.取下試管，加入 5 倍磁珠溶液體積的 PBS 緩沖液，通過震蕩重新懸浮磁珠，渦旋 30 秒。將試管至于室溫環(huán)境 1-3 分鐘，再將管放在磁力分離器上 1-3 分鐘。當(dāng)磁珠沉淀 時，去除上清液。 

3.重復(fù)步驟 2 兩次。 

4.向含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的粗樣品中添加洗滌過的磁珠，并在室溫或所需溫度下溫浴 1-2 小時 （溫度越低，培養(yǎng)時間越長）。提示：強烈建議進行滴定實驗以優(yōu)化培養(yǎng)時間。因為孵化 的時間太長可能會導(dǎo)致很高的背景。 

5.用 5 倍磁珠體積的 PBS 緩沖液或 1M NaCl 清洗磁珠，直到 280nm 處洗脫液的吸 光度接近背景水平（OD 280<0.05）。提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑也 可能會降低非特異性背景。例如，向洗滌緩沖液中添加 NaCl（濃度為 1-1.5 M）、0.1-0.5% 的非離子洗滌劑，如 TritonX-100 或 Tween-20，以及還原劑，如 DTT 或 TCEP（我們通 常使用 3mM）。 6.通過適當(dāng)?shù)姆椒?，如?pH（2-4）、高 pH（10-12）、高鹽、高溫、親和洗脫或 SDS-PAGE 上樣緩沖液中煮沸，洗脫目標(biāo)蛋白。

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