產(chǎn)品名稱 ：氨基酸(AA)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)
貨號(hào) ：YX2159
產(chǎn)品規(guī)格 ：100T
儲(chǔ)存條件 ：4℃。避光
有效期 ：6個(gè)月
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
氨基酸(AA)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)檢測(cè)原理是在弱酸條件下，氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產(chǎn)生藍(lán)紫色的二酮茚胺(又稱Ruhemans紫)，其吸收峰在波長(zhǎng)570nm處，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比，該試劑盒主要用于檢測(cè)植物組織、血清、尿液、食品、藥品等中的總游離氨基酸含量。
實(shí)驗(yàn)流程:
1、 準(zhǔn)備樣品
①植物樣品：取新鮮植物組織，稱取0.4g，按植物組織：AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)勻漿或研磨，用無氨蒸餾水稀釋至40ml，混勻，
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，
③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行勻漿，1000g離心5min，留取上清即為氨基酸粗提液
④高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、配制茚三酮顯色液: 取0.3g茚三酮，溶解于50ml茚三酮稀釋液，攪拌或超聲處理至完-全溶解，即為茚三酮顯色液。
3、配制茚三酮工作液: 取適量的茚三酮顯色液、AA Assay buffer，按茚三酮顯色液：AA Assay buffer=35：3的比例混合，即為茚三酮工作液
4、配制維生-素C工作液: 取出1支維生-素C，準(zhǔn)確溶解于30ml無氨蒸餾水，混勻
5、配制系列氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(50μg/ml)恢復(fù)至室溫，用無氨蒸餾水將其稀釋至10μg/ml，然后按下表繼續(xù)稀釋：
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(10μg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
無氨蒸餾水 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
氨基酸濃度(μg/ml) | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
6、AA加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入
加入物(ml) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
無氨蒸餾水 | 0.30 | — | — |
系列氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(1~5號(hào)管) | — | 0.30 | — |
待測(cè)樣品 | — | — | 0.30 |
茚三酮工作液 | 0.45 | 0.45 | 0.45 |
維生-素C工作液 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
混勻，80℃中加熱20min，冰水迅速冷卻。 | |||
7、AA測(cè)定：加60%乙醇2.1ml，混勻；立即以空白調(diào)零，分光光度計(jì)(比色杯光徑1cm)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管570nm處吸光度(記為A標(biāo)準(zhǔn)、A測(cè)定)。
