Cell Counting Kit-8（CCK-8）細胞增殖試劑盒
產(chǎn)品貨號：C6005M
產(chǎn)品規(guī)格：500T
儲存條件：4℃避光保存，長期儲存置于-20℃，有效期見外包裝。
產(chǎn)品介紹：
Cell Counting Kit-8簡稱CCK8（或WST-8）試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4- 二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）顯色反應(yīng)的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8 工作原理：在電子耦合試劑存在的條件下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物 （formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映 活細胞數(shù)量。
WST-8 是 MTT 的一種升級替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而 WST-8、XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8 產(chǎn)生的甲臜比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8 與 MTT、XTT 相比線性范圍更寬，靈敏度更高。
CCK 法廣泛應(yīng)用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面。
使用方法：
1. 細胞活性檢測
（1）在 96 孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔），建議可以設(shè)置 8 個細胞濃度梯度，每個濃度設(shè)置 6 個重復進行細胞鋪板， 例如按照細胞個數(shù) 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進行鋪板。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（37℃, 5% CO2）。
（2）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。 注：如產(chǎn)品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。
（3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 0.5 - 4 h。 注：初次實驗可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
（4）用酶標儀測定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。 （5）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并將培養(yǎng)板在室溫條件下避 光保存。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
2. 細胞增殖-毒性檢測
（1）在 96 孔板中接種 100 μL 的細胞懸液，建議可以設(shè)置 8 個細胞濃度梯度，每個濃度設(shè)置 6 個重復進行細胞鋪板，例如 按照細胞個數(shù) 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進行鋪板。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（37℃, 5% CO2）
（2）向培養(yǎng)板加入 1 - 10 μL 特定的藥物刺激。
（3）于培養(yǎng)箱中孵育一段時間（例如：6、12、24 或 48 h）。
（4）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。 注：如產(chǎn)品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。
（5）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 0.5 – 4 h。 注：初次實驗可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
（6）用酶標儀測定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。
（7）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室 溫條件下。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
注：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然 后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的 空白吸收即可。
3. 計算公式
細胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x 抑制率 =[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x As:實驗孔(含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測藥物)的吸光度 Ac:對照孔(含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測藥物)的吸光度 Ab:空白孔(不含細胞和待測藥物的培養(yǎng)基、CCK-8)的吸光度
注意事項
1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進行后續(xù)實驗。
2. 使用96孔進行細胞鋪板，如果培養(yǎng)時間較長， 一定要注意蒸發(fā)問題。建議采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、 水或者培養(yǎng)液。
3. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。
4. 本產(chǎn)品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
