Super ECL Plus（超敏化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒）
產(chǎn)品貨號：S6009M
產(chǎn)品規(guī)格：100 mL
儲存條件：4℃密封避光保存，短期可放置于室溫。有效期見外包裝。
產(chǎn)品介紹：
Super ECL Plus 免疫印跡底物是增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（ECL） 過氧化物酶的底物，可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現(xiàn) 低表達(dá)或高價值蛋白的檢測。 Super ECL Plus 底物可為使用辣根過氧化物酶（HRP）偶 聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號，對低表達(dá)或高價值蛋 白檢測靈敏度很高。該 ECL 底物能夠兼容各種膜、封閉液 和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價比，滿 足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。 Super ECL Plus（超敏）特點： 1. 具有靈敏度：檢測硝化纖維素膜或 PVDF 膜上低表 達(dá)或高價值的蛋白條帶； 2. 長信號持續(xù)時間：條件優(yōu)化的情況下，經(jīng)底物孵育的印 跡條帶能夠持續(xù)輸出 6 至 8 h 的可檢測光信號； 3. 價格經(jīng)濟(jì)：配方經(jīng)過優(yōu)化，適用于濃度極低的抗體檢測。 • 0.2-1 μg/mL 一抗（或 1 mg/mL 的稀釋 1:1,000-1:5,000） • 10-50 ng/mL 二抗（或 1 mg/mL 的稀釋 1:20,000-1:100,000）
使用方法：
1. 執(zhí)行常規(guī) SDS-PAGE 電泳、轉(zhuǎn)膜和 Western Blot 步驟，1.0-0.2 μg/mL 一抗室溫孵育 1 h 或 4℃過夜，洗膜后，10-50 ng/mL 二抗孵育 30-60 min。 2. Western Blot 最后一次洗膜時，新鮮配制發(fā)光工作液：分 別取等體積的溶液 A 和 B，混勻。 注：建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈 敏度略有降低。 3. 成像儀檢測：用鑷子取出 PVDF 膜置于成像儀檢測板上， 含蛋白面朝上，瀝干洗液但勿使膜干燥。將發(fā)光工作液 （0.125 mL 發(fā)光工作液/cm2 膜）滴加在 PVDF 膜上，使發(fā) 光液覆蓋 PVDF 膜，室溫孵育 3-5 min，參考儀器說明 書進(jìn)行檢測。 4. 壓片檢測：用鑷子取出 PVDF 膜置于保鮮膜上，含蛋白 面朝上，瀝干洗液但勿使膜干燥。將發(fā)光工作液（0.125 mL 發(fā)光工作液/cm2膜）滴加在 PVDF 膜上，使發(fā)光液覆蓋 PVDF 膜，室溫孵育 3-5 min，棄發(fā)光工作液，用保鮮 膜包好，將膜固定于片夾內(nèi)，含蛋白面向上。暗室內(nèi)壓片 1 min，立即顯影，根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時間。或分別壓片 0.5、 1、3、5 min，然后一起顯影觀察結(jié)果。
注意事項：
1. 發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能有降低，操作 時注意避光。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 長時間曝光會加深背景；蛋白過量，會使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系；曝光不足，則條帶模糊或較淺。 3. 如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育 二抗，然后重新用 ECL 曝光。 4. 使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。 5. NaN3 會抑制 HRP 活性，回收二抗應(yīng)避免使用 NaN3，如 必需使用勿超過 0.01%。
