葉綠體色素(葉綠素ab和類胡蘿卜素)試劑盒
葉綠體色素(葉綠素ab和類胡蘿卜素)試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 葉綠體色素含量測定試劑盒說明書 (貨號：WS3160W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 葉綠體中所含色素主要有兩大類，葉綠素(包括葉綠素 a 和葉綠素 b)和類胡蘿卜素(包 括胡蘿卜素和葉黃素)，它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，成為色素蛋白復合體，其含量 多少及其組成決定了植物對不同光的吸收、利用效率，常常作為研究光合生理的重要指標。 根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，在 649nm 和 665nm 處測定葉綠素提取物的 吸光值，在 470nm 處測定類胡蘿卜素；然后利用經(jīng)驗公式計算出樣品中葉綠素 a 含量、 葉綠素 b 含量、葉綠素總含量及類胡蘿卜素含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 試劑一 粉劑×1 瓶 4℃保存 乙醇（自備） 1000mL×1 瓶 4℃保存 抽提 Buffer 配制：（體積比）乙醇：蒸餾水=95:5 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、天平、10mL 玻璃試管、錫箔紙、無水乙醇。 四、葉綠體色素含量的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備 （1）取新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈。 （2）稱約 0.1g 剪碎，用蒸餾水洗干凈，然后加入 1mL 抽提 Buffer，少量試劑一（約 50mg）， 葉綠素對光敏感，務(wù)必在黑暗或弱光條件下充分研磨（難磨葉片可以添加少量石英砂助 磨），然后轉(zhuǎn)移至 10mL 玻璃試管。 （3）用抽提 Buffer 沖洗研缽，將所有沖洗液及研缽中所有的綠色物質(zhì)轉(zhuǎn)入 10mL 玻璃試管， 用抽提 Buffer 補充至 10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提 3h，觀察試 管底部組織殘渣*全變白則提取*全，若組織殘渣未*全變白，繼續(xù)浸提至其*全變白。 2、上機檢測 分別取200μL浸提液和200μL抽提Buffer于96孔板，記為測定管和空白管，分別于665nm 和 649nm 和 470nm 處讀取吸光值 A，△A 665=(A 測定-A 空白) 665，△A 649=(A 測定-A 空白) 649，△A 470=(A 測定-A 空白) 470。 【注】：若吸光值 A 超過 1，待檢測的浸提液用抽提 buffer 稀釋，計算公式乘以稀釋倍數(shù)。 五、結(jié)果計算： 葉綠素 a 含量（mg/g 鮮重）=Ca× D W V 1000 ? ? 葉綠素 b 含量（mg/g 鮮重）=Cb× D W V 1000 ? ? 葉綠素總含量（mg/g 鮮重）=CT× D W V 1000 ? ? 類胡蘿卜素含量（mg/g 鮮重）=Cc× D W V 1000 ? ?本試劑盒僅供科研使用 Ca=13.95×△A665–6.88×△A649 (mg/L)； Cb=24.96×△A649–7.32×△A665(mg/L)； CT=6.63×△A665+18.08×△A649(mg/L)； Cc=(1000×△A470-2.05×Ca-114.8×Cb)÷245(mg/L) =(1000×△A470-2851.304×△A649+811.7385×△A665)÷245 (mg/L)； V---代表提取液體積，10mL； D---代表稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---代表樣本質(zhì)量，g。 2
