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丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒,微板法

參考價(jià)	￥1370.00

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￥1370.00

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公司名稱上海宇淳生物科技有限公司
品牌其他品牌
型號(hào)
所在地上海市
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
更新時(shí)間2024/6/20 16:30:49
訪問次數(shù)962

產(chǎn)品標(biāo)簽:

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒微板法

規(guī)格

96T

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上海宇淳生物科技有限公司是一家致力于生物技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)試劑和耗材銷售，有專業(yè)的科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)人員。承接免疫學(xué)、分子學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)、動(dòng)物造模等技術(shù)實(shí)驗(yàn)，可為高校醫(yī)院及科研單位提供包括病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等技術(shù)服務(wù)，并建立了包含實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)項(xiàng)目實(shí)施結(jié)果整理數(shù)據(jù)分析及策略咨詢等一站式的科研服務(wù)。本公司還代理許多先進(jìn)水平的產(chǎn)品，包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、診斷等多個(gè)研究及應(yīng)用領(lǐng)域。公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國，在同行獲得*好評(píng)。特別是生物試劑和細(xì)胞產(chǎn)品更是種類齊全、價(jià)格實(shí)惠。主營產(chǎn)品/服務(wù):試劑盒：ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒。細(xì)胞：美國*原代細(xì)胞，細(xì)胞系，細(xì)胞株，專業(yè)培養(yǎng)基，常用傳統(tǒng)培養(yǎng)基，耗材：細(xì)胞培養(yǎng)耗材、普通實(shí)驗(yàn)耗材。生化試劑：*生化試劑、進(jìn)口分裝生化試劑、國產(chǎn)生化試劑。抗體：進(jìn)口原裝抗體、進(jìn)口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、一抗、二抗等等。公司的理念是：為您提供*的產(chǎn)品及服務(wù)，產(chǎn)品價(jià)格較好的競(jìng)爭(zhēng)力。

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丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒,微板法
丙酮酸脫氫酶（PDH，EC 1.2.4.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒,微板法產(chǎn)品信息

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 丙酮酸脫氫酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）試劑盒說明書（貨號(hào)：WS6380W 微板法 96 樣）一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：丙酮酸脫氫酶（PDH，EC 1.2.4.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。丙酮酸脫氫酶（PDH）催化底物丙酮酸鈉生成羥*基-TPP，在電子傳遞體（PMS）存在下，使噻唑藍(lán)（MTT）還原生成藍(lán)色產(chǎn)物，通過檢測(cè)該藍(lán)色產(chǎn)物在 566nm 處的增加速率，即可得出 PDH 酶活性大小。二、試劑盒的組成和配制：試劑名稱規(guī)格保存要求備注試劑一液體 100mL×1 瓶 -20℃保存試劑二液體 20mL×1 瓶 -20℃保存試劑三液體μL×1 支 -20℃保存試劑四粉劑 mg×2 支 4℃保存用前甩幾下使試劑落入底部，每支加 0.6mL 的蒸餾水溶解。試劑五粉劑 mg×4 支 4℃避光保存用前甩幾下使試劑落入底部，每支加 0.3mL 的蒸餾水溶解。一天內(nèi)用完。試劑六粉劑 mg×2 支 4℃避光保存用前甩幾下使試劑落入底部，每支加 0.6mL 的蒸餾水溶解。一周內(nèi)用完。試劑七液體 16mL×1 瓶 4℃保存三、所需的儀器和用品：酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。四、丙酮酸脫氫酶（PDH）活性測(cè)定： 1、線粒體制備（提示：整個(gè)線粒體的提取過程須保持 4℃低溫環(huán)境）： ① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)菌/細(xì)胞，加入 1mL 試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿，轉(zhuǎn)移至離心管后于 4℃×700g 離心 10min。 ② 棄沉淀，上清液移至另一離心管中，4℃×12000g 離心 10min。用移液器移除上清液(上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的酶活性（此步可選做）)，留下沉淀（沉淀即為線粒體）。 ③ 在沉淀（線粒體）中加入200μL試劑二和2μL試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或 200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），液體置于冰上用于丙酮酸脫氫酶活性測(cè)定。【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取，或按照細(xì) 菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 566nm。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ③ 在 96 孔板中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL）測(cè)定管樣本 10 試劑四 10 試劑五 10 試劑六 10 試劑七 160 混勻，30℃下，10s 時(shí)于 566nm 處讀取吸光值 A1，20min 后讀取吸光值 A2，△A=A2-A1。五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個(gè)酶活性單位。 PDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=107.2×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算：酶活定義：每克組織每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個(gè)酶活性單位。 PDH 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=21.7×ΔA÷W 3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：酶活定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個(gè)酶活單位。 PDH 活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.044×ΔA ε---還原型 MTT 的摩爾消光系數(shù)，1.865×104 L/mol/cm； d---96 孔板光徑，0.5cm； V---加入提取液體積，0.202mL； V1---加入樣本體積，0.01 mL； V2---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； T---反應(yīng)時(shí)間，20min； W---樣本質(zhì)量，g； 500---細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。