Human DiI-LDL (Human DiI-Low Density Lipoprotein)

紅色熒光標記人源低密度脂蛋白

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想了解更多脂蛋白產(chǎn)品的背景知識，可見MKBio整理的技術(shù)文章：脂蛋白類型與作用機理。

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搜索關(guān)鍵詞：

HDL；LDL；DiI-LDL；氧化修飾Ox-LDL；乙?；揎桝c-LDL；LDL receptor LDL受體；Cholesterol膽gu醇；Cholesteryl ester (CE)膽gu醇酯 ；Triglyceride (TG)甘油三酯；Cardiovascular diseases心血管疾病；Atherosclerosis (AS)動脈粥樣硬化； 

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溫馨提示：由于脂蛋白的保存周期比較短，約6周。本司一般都是接到訂單后再生產(chǎn)，從而保證客戶拿到最長效期的產(chǎn)品。所以，我們貨期至少要2天以上。

基本描述：

低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，簡稱為LDL）是血液中五種常見脂蛋白之一，由極低密度脂蛋白（VLDL）通過脂蛋白脂肪酶（LPL）的作用使其喪失部分甘油三酯轉(zhuǎn)化而來。LDL是主要的膽gu醇和膽gu醇酯轉(zhuǎn)運體，占血漿脂蛋白總量的一半以上。LDL通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被肝臟和其他組織吸收。LDL受體的胞漿結(jié)構(gòu)域促進衣被小窩（膜上富集受體區(qū)域）的形成，而受體的配基結(jié)構(gòu)域可識別LDL的apo-B100，進而引起披網(wǎng)格蛋白小泡產(chǎn)生。ATP依賴的質(zhì)子泵降低小泡內(nèi)環(huán)境pH，引起LDL與受體解離，一旦喪失連接到溶酶體的披網(wǎng)格蛋白小泡，導(dǎo)致多肽和膽gu醇酯的酶水解發(fā)生。之后LDL受體重新循環(huán)到細胞膜。研究顯示胰島素、三碘甲狀腺原氨酸（T3）和地sai米松都能參與調(diào)控LDL受體介導(dǎo)的內(nèi)吞。LDL作為一個大蛋白（Mw 3500kDa），直徑25.8nm，由約20-25%蛋白和75-80%脂質(zhì)構(gòu)成。其中脂質(zhì)部分由9%游離膽gu醇、62%膽gu醇酯、20-24%磷脂和5%甘油三酯組成。

本品是紅色熒光探針DiI（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）標記的人源LDL（Human LDL），用來觀察培養(yǎng)細胞的LDL結(jié)合位點，或篩選LDL受體表達缺陷型的細胞突變株。也可通過流式細胞術(shù)評估細胞受體水平或檢測組織的受體水平。DiI-LDL是細胞內(nèi)吞研究的ji好標記物。通過納米顆粒的片段穿透進入細胞膜，用來分離和培養(yǎng)臍帶血來源的造血干細胞。也能將脂肪和膽gu醇通過血液流動運輸?shù)饺怼?/span>本品為無菌包裝，可用PBS磷酸鹽緩沖液或細胞培養(yǎng)基直接稀釋使用即可。

產(chǎn)品特性：

1）濃度：0.8-4.0 mg/ml
2）外觀：乳狀液體
3）緩沖液組分：PBS（含EDTA），pH7.2-7.4
4）吸光度比例：Dil/Protein=555nm/275nm=1.30

保存與運輸方法

保存：2-8℃避光保存，6周有效。不可凍存！操作時注意無菌操作！

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定，建議現(xiàn)配現(xiàn)用； 

2） 本品長期貯存可能會有沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，低速離心2 min去除沉淀后使用即可；

3） LDL與LDL受體的結(jié)合需要Ca2+和Mn2+的參與，過量EDTA的存在會抑制其結(jié)合；

4） 關(guān)于脂蛋白的更多信息，可見懋康生物整理的脂蛋白（Lipoproteins）產(chǎn)品專題。

5） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

1) 無菌條件下，將Human DiI-LDL用細胞培養(yǎng)基稀釋至20-40 µg/ml。

2) 加入活細胞內(nèi)，37℃培養(yǎng)3-6小時。

3) 孵育結(jié)束，吸去含Human DiI-LDL的培養(yǎng)基，并用無探針的培養(yǎng)基洗幾次。

4) 根據(jù)實驗需求用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

a) 熒光顯微鏡觀察

采用標準的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請使用含3%甲醛的PBS進行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有機溶劑?！咀ⅰ啃柙O(shè)陽性細胞以做對照。

b）  流式細胞分選

胰蛋白mei處理細胞或者加入EDTA制成單細胞懸液，選用合適的已標記純化細胞用作陰性和陽性對照，從而進行流式分選設(shè)門（gate）。（建議使用波長為Ex：488/514/549nm；Em：565nm）。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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