豬乙型腦炎抗體診斷檢測(cè)試劑盒
規(guī)格：96T*2/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于檢測(cè)豬血清中豬乙型腦炎病毒抗體。評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷。
【原    理】
豬乙型腦炎抗體診斷檢測(cè)試劑盒系由預(yù)包被豬乙型腦病毒抗原的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清或血漿中豬乙型腦病毒特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在包被板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬乙型腦病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。
【儲(chǔ)存及有效期】
于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，使用期限為1個(gè)月。
【試劑盒組成】
1. 豬乙型腦病毒抗原預(yù)包被微孔板條 96T×2
2. 酶標(biāo)記物  （紅蓋） 11ml×2
3. 樣品稀釋液  （黃蓋） 50ml×1
4. 20X濃縮洗滌液  （透明蓋） 40ml×1
5. 底物液A  （白蓋） 11ml×1
6. 底物液B  （黑蓋）  11ml×1
7. 終止液  （黃蓋）  11ml×1
8. 陽(yáng)性對(duì)照血清  （紅蓋，已滅活） 1 ml×1
9. 陰性對(duì)照血清  （綠蓋，已滅活） 1 ml×1
10. 蓋板膜 1張
11. 自封袋 1個(gè)
12. 說(shuō)明書(shū) 1份
【樣品制備】  取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品短期可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。
【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋?！驹囼?yàn)操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條，設(shè)空白、陰性及陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl；空白對(duì)照孔不加。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A450）。
【結(jié)果判定】
1.陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔A值≤0.1；
2.陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔A值≥0.5；
3.結(jié)果判定：樣品A450值大于0.38，判為陽(yáng)性；樣品A450值在0.2到0.38之間，判為可疑；樣品A450值小于0.2，判為陰性。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬乙型腦病毒IgG抗體。