產(chǎn)品信息：
貨號(hào) | CS-X2010 | 種屬 | 人 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
溫度 | 液氮 | 培養(yǎng)條件: | 氣相：空氣，95%；CO2，5% |
鑒定 | STR鑒定正確 | 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
商品介紹：
產(chǎn)品名稱：786-O 786-0 (人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞) 種屬 人類 年齡（性別） 男性，58歲 組織來(lái)源 腎；腎細(xì)胞腺癌 生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣 背景描述 786-O [786-0]細(xì)胞源自一個(gè)原發(fā)性透明細(xì)胞癌；786-O [786-0]細(xì)胞有微絨毛和橋粒，能在軟瓊脂內(nèi)生長(zhǎng)。786-O [786-0]細(xì)胞生成的一個(gè)PTH樣的多肽與乳癌和肺癌中的肽相似。這個(gè)多肽的N端與PTH相似，活性與PTH相似，分子量為6000道爾頓。 生物安全等級(jí) 1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例 1:3-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 倍增時(shí)間 ~24-45小時(shí) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性 Yes, in immunosuppressed hamsters. 保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1932 BCRC; 60243 |
細(xì)胞保存方法：
（一）細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；
8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
注意事項(xiàng)：
1）、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2）、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無(wú)，而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3）、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，無(wú)菌且無(wú)色(以0. 22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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HT-29 (人結(jié)腸癌細(xì)胞) | 轉(zhuǎn)基因植物NPTII基因核suan檢測(cè)試劑盒 |
HuH-6 (人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞) | 阿留申病病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
操作步驟：
1）、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
3）、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4）、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動(dòng)試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
