使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。?產(chǎn)品名稱:產(chǎn)色葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Staphylococcus chromogenesPCR
規(guī)格:詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
類(lèi)別:PCR檢測(cè)試劑盒
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。
?
性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多PCR檢測(cè)試劑盒。
.試劑盒檢測(cè)特異性為00%
2. 檢測(cè)試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。?pRSV-rev英文名(EN):,,3,3-Tetramethyldisiloxane,≥98.0%CAS No.:3277-26-7規(guī)格(SP):25G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSC94英文名(EN):,,3,3-Tetramethyldisilazane,≥98.0%CAS No.:5933-59-2規(guī)格(SP):0G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSE380英文名(EN):Tetrakis(trimethylsilyl)silane,≥97.0%CAS No.:4098-98-0規(guī)格(SP):G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSE934英文名(EN):,2-Diiodotetrafluoroethane,≥98.0%CAS No.:354-65-4規(guī)格(SP):G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSecTag 2A英文名(EN):Tetraethylsilane,≥95.0%CAS No.:63-36-7規(guī)格(SP):5ML類(lèi)別(Key):通用試劑
pBAD24英文名(EN):Tetracontane,≥95.0%CAS No.:48-95-7規(guī)格(SP):500MG類(lèi)別(Key):通用試劑
pSecTag B英文名(EN):Benzo-,4-dioxane,≥97.0%CAS No.:493-09-4規(guī)格(SP):0G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSecTag2/Hygro A英文名(EN):,4,8,-Tetraazacyclotetradecane,98%CAS No.:295-37-4規(guī)格(SP):G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSEP英文名(EN):Glyoxal bis(diallyl acetal) ,85%CAS No.:6646-44-9規(guī)格(SP):50G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSEP2英文名(EN):3-Glycidyloxypropyltrimethoxysilane,≥...CAS No.:2530-83-8規(guī)格(SP):00ML類(lèi)別(Key):通用試劑
pSEP3英文名(EN):3-Chloropropyltriethoxysilane,95%CAS No.:5089-70-3規(guī)格(SP):00ML類(lèi)別(Key):通用試劑
pSET52英文名(EN):3-(2-Aminoethylamino)propyldimethoxyme...CAS No.:3069-29-2規(guī)格(SP):0ML類(lèi)別(Key):通用試劑
pSFV英文名(EN):n-Propyltriethoxysilane,≥98%CAS No.:237449規(guī)格(SP):25G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSG54英文名(EN):N-[3-(Trimethoxysilyl)propyl]ethylened...CAS No.:760-24-3規(guī)格(SP):00ML類(lèi)別(Key):通用試劑
pSH47英文名(EN):3-Aminopropyl(diethoxy)methylsilane,97%CAS No.:379-76-8規(guī)格(SP):50ML類(lèi)別(Key):通用試劑
pSH63英文名(EN):Bis(diphenylphosphino)methane,≥97%CAS No.:207-20-7規(guī)格(SP):G類(lèi)別(Key):通用試劑
pSH65英文名(EN):,2-Bis(dimethylphosphino)ethane,97%CAS No.:23936-60-9規(guī)格(SP):250MG類(lèi)別(Key):通用試劑
pShooter英文名(EN):,2-Bis(diphenylphosphino)ethane,99%CAS No.:663-45-2規(guī)格(SP):G類(lèi)別(Key):通用試劑
產(chǎn)色葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格DL- 規(guī)格:20mg Scopoletin
FMOC-L- 規(guī)格:00mg Nitrofurfural Diacetate
CBZ-D- 規(guī)格:2ml×2amplues Dicyclohexyl
L-甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:200mg Iodixanol
L-二甲酯酸鹽 規(guī)格:300mg Pilocarpine
L-二甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:250mg Fosphenytoin Sodium
L-二乙酯鹽酸鹽 規(guī)格:0.2ml
L-異甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:5mg
L-甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:200mg Cefdinir
L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:.5g Powdered Chaste Tree Extract
L-賴氨酸乙酯酸鹽 規(guī)格:50mg
L-苯甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:200mg Naphthalene
L-苯乙酯鹽酸鹽 規(guī)格:0mg
L-苯甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:500mg Mandelic Acid (AS)
L-苯乙酯鹽酸鹽 規(guī)格:400mg Sodium Starch Glycolate Type A