細(xì)胞保存方法：
（一）細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
產(chǎn)品信息：
貨號 | CS-X2006 | 種屬 | 小鼠 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
溫度 | 液氮 | 培養(yǎng)條件: | 氣相：空氣，95%；CO2，5% |
鑒定 | STR鑒定正確 | 生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10%CS＋1% P/S |
商品介紹：
產(chǎn)品名稱：3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 種屬 小鼠 年齡（性別） 胚胎 組織來源 胚胎 生長特性 貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣 背景描述 3T3-L1細(xì)胞是通過克隆分離得到的3T3(swiss小白鼠)的連續(xù)亞株。當(dāng)3T3-L1細(xì)胞從快速分裂到長滿且接觸抑制時，3T3-L1細(xì)胞經(jīng)過前脂肪向脂肪樣逆轉(zhuǎn)。培養(yǎng)液中，高血清含量可以促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪的積累。 生物安全等級 1 生長培養(yǎng)基 DMEM＋10%CS＋1% P/S 推薦傳代比例 1:3-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 受體表達(dá)情況 insulin, expressed 保藏機構(gòu) ATCC; CL-173 ATCC; CCL-92.1BCRC; 60159 |
操作步驟：
1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。
2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
3）、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4）、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
注意事項：
1）、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。
2）、細(xì)胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3）、注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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Ca Ski (人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞/人宮頸癌上皮細(xì)胞) | 倉鼠組織蛋白meiK(cath-K)檢測試劑盒 |
CA46 (人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞) | 蘋果黑星病菌 PCR 試劑盒 |
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CaES-17 (人食管癌細(xì)胞) | 多食棘阿米巴屬通用PCR檢測試劑盒 |
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L2 (大鼠肺泡上皮細(xì)胞) | 阿菲波菌屬通用PCR試劑盒 |
CCD-1095Sk (人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞) | 3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)2×SYBR Green qPCR Mix試劑盒（含ROX） |
CCRF-CEM [CCRF CEM] (人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞) | 轉(zhuǎn)基因植物TETR基因PCR檢測試劑盒 |
CFPAC-1 (人胰腺癌細(xì)胞) | 加州立克次體PCR檢測試劑盒 |
