菌落總數(shù)測試片

1 原理及適用范圍
菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的微生物檢測項目。
菌落總數(shù)測試片（FilmplateTM Aerobic count plate BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標準的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強計數(shù)效果。
本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定，也可用于檢測食品加工容器、操作臺和其他設(shè)備表面的菌落總數(shù)。
執(zhí)行標準：食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定??PetrifilmTM測試片法（GB/T 4789.2-2008）。
2 操作方法
2.1 樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2.2 接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將（BB202）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養(yǎng)基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
2.3 培養(yǎng)：將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48h。
3 結(jié)果判讀
細菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（30～300個）的測試片進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細菌菌落總數(shù)。


4 計數(shù)原則及報告方式
4.1 若只有一個稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個紙片菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升（或克）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。
4.2 若有兩個連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按式（1）計算:

式中：
N??樣品中菌落數(shù)；
∑C??測試片上（含適宜范圍菌落數(shù)的測試片）菌落數(shù)之和；
n1??*個適宜稀釋度測試片數(shù)；
n2??第二個適宜稀釋度測試片數(shù)；
d??稀釋因子（*稀釋度）。
示例：
4.3 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300，則對稀釋度zui高的測試片進行計數(shù)，其他測試片可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以zui高稀釋倍數(shù)計算。
4.4 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以zui低稀釋倍數(shù)計算。
4.6 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分小于30或大于300，則以zui接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
4.7 菌落總數(shù)的報告
4.7.1 菌落總數(shù)在100以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。
4.7.2 大于或等于100時，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代替位數(shù)，也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。
4.7.3 若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不可計。
4.7.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。
4.7.5 稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。
5 表面取樣方法
加1mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在測試片上，至少靜置5min，使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
6 附加說明
6.1 檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達80％以上，山東省疾病預(yù)防控制中心進行的驗證試驗表明，24h計數(shù)測試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的87％。
6.2 磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。
6.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000mL蒸餾水或純凈水中，先煮開后進行分裝，取9mL加入到10mL潔凈試管中，蓋上硅橡膠塞或棉紗塞，放入紅外線消毒柜中消毒。
7 保存條件
本產(chǎn)品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質(zhì)期為一年，鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一個月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水，在拆封前將整包回溫至室溫。