人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒價格雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2) 加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3) 加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標(biāo)用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測。
固相載體
固相載體在人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒價格測定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA 中載體的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,加之它的價格低廉,所以被普遍采用。
聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。ELISA 載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12 的96 孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA 板相同。ELISA 板的特點(diǎn)是可以同時進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA 檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測抗體時空白值較大。
良好的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒價格板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG 抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA 固相載體,聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可剪割,價廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,可應(yīng)用如下的試驗(yàn):用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測定,然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。
在人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒價格ELISA中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài),因此珠式人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒價格的反應(yīng)往往更為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。小試管作為固相載體也有較大的吸附表面,而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式ELISA的標(biāo)本量一般為100-200ul,而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積,標(biāo)本反應(yīng)量的增加有助于試驗(yàn)敏感性的提高。小試管還可以當(dāng)作比色杯,zui后直接放入分光光度計(jì)中比色。
也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA固相載體的。其優(yōu)點(diǎn)是表面積極大,反應(yīng)在懸液中進(jìn)行,其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離,洗滌方便,試劑盒一般均配以特殊儀器。
人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測試劑盒價格相關(guān)產(chǎn)品如下:hz-2259E 大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2260E 大鼠吡啶酚(PYD)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2261E 大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2262E 大鼠骨堿性磷酸酶(BALP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2263E 大鼠凝聚素(CLU)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2264E 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2265E 大鼠白介素32(IL-32)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2266E 大鼠孕酮受體(PROGR)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2267E 大鼠白介素21(IL-21)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2268E 大鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2269E 大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2270E 大鼠膽固醇(CH)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2271E 大鼠甘油三酯(TG)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2272E 大鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2273E 大鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2274E 大鼠孕酮受體(PGR)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2275E 大鼠血管緊張素Ⅱ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅡ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2276E 大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅠ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2277E 大鼠促性腺激素釋放激素受體(GnRHR)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2278E 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2279E 大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2280E 大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2281E 大鼠檸檬酸合酶(CS)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2282E 大鼠L-鼠乳酸脫氫酶(L-LDH) ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2283E 大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2284E 大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2285E 大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(pACCase)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2286E 大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2287E 大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2288E 大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2289E 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2290E 大鼠總膽汁酸(TBA)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2291E 大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-2292E 大鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA kit 血清/組織/尿液