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從土壤等復雜樣品中提取DNA

閱讀:444發(fā)布時間:2013-4-2

在植物賴以生存的土壤中,生活著大量的微生物,包括細菌、真菌、放線菌、病毒和原生生物等。據估計,1 g土壤中有4,000~7,000種細菌,數量近10億個。然而,由于土壤環(huán)境的復雜性,常規(guī)的培養(yǎng)法、生物量測量法都對這些微生物束手無策。這時,分子生物學技術就成為研究土壤宏基因組的新式武器。
盡管我們派出了新式武器,但土壤畢竟不同于實驗室的細菌培養(yǎng)液,土壤本身的異質性、微生物的多樣性及其對土壤顆粒的黏附都使得DNA的提取比較困難。此外,樣品中常常存在腐植酸類物質,它們可能抑制下游反應中的DNA聚合酶和限制性內切酶的活性,降低轉化效率,須盡量除去。因此,一般的*是無法勝任的,專門的土壤*才更給力。
生物通小編發(fā)現,美國MO BIO公司專門研究復雜樣本的核酸純化,針對土壤樣品、水樣及生物膜,推出了一系列*。有了這些試劑盒,一切就簡單多了。不用費心地去研究各個版本的protocol,不用擔心抽提效果不好,連配試劑也省了。
土壤樣品的DNA提取
MO BIO有兩個系列的土壤*,Ultra和Power。Ultra可謂入門級,它能夠從土壤中提取PCR級的DNA,并去除樣品中的腐植酸。目前,UltraClean® 土壤*已逐漸成為世界各地土壤微生物研究者們的方法。Power則是強力級,包含的抑制劑去除技術,在應對抑制劑方面當然更為強大,是處理復雜樣品的更好選擇。
純化的原理并不復雜。首先將土壤樣品加入管中,此管還含有微珠、裂解液、微珠溶液和抑制劑去除溶液。通過熱、去污劑以及機械力這三大組合,來裂解微生物。隨后,通過震蕩器的機械作用裂解細胞。裂解后,釋放出的DNA結合到硅膠膜上。洗滌之后回收DNA。整個過程非常快速,在30分鐘內即可完成。
若樣品是基本土壤,那可以選擇Ultra系列。它能夠有效去除抑制劑,快速純化出高質量的DNA,長度達50 kb以上。密歇根州立大學植物學和植物病理學系的Elise C. Poole在使用了這款試劑盒后,評價相當高。“我的研究涉及到廣泛的土壤取樣,分析土壤中馬鈴薯瘡痂病菌的存在。我已經使用此試劑盒來處理樣品,并對結果非常滿意,不僅DNA的量穩(wěn)定,且質量很高,適合PCR。我會繼續(xù)使用,因為它很快,我用過的其他試劑盒都沒有這么快。”
但若是面對更有挑戰(zhàn)性的樣品,如高腐植酸含量樣品,包括堆肥、沉積質和化肥等,那Power系列才是理想之選。這個新一代的產品有著的抑制劑去除技術(IRT),能夠從即使是zui困難的土壤類型中去除腐植酸和土壤中的褐色物質,為下游成功的PCR分析助上一臂之力。后續(xù)的PCR分析適合多種生物的檢測,包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、真菌、藻類,放線菌類以及線蟲類等。
據MO BIO介紹,美國國家*、*、FBI和疾控中心均使用了這些土壤DNA試劑盒,用于生物防治、農業(yè)和生態(tài)分析。其實,PowerSoil® 土壤*還能用于土壤之外的其他樣品類型。MO BIO的客戶就曾成功提取了食品(奶酪、牛奶、肉類、水果)、水、昆蟲和糞便樣品中的DNA。所以說,名字都是浮云,實踐才是*。
Ultra和Power系列各有三種*,分別適用于不同的樣品量和通量。除了基本型之外,還有96孔形式的高通量試劑盒和適合大量樣品的試劑盒。
土壤*的選擇指南:
名稱通量樣品量結合能力處理時間
PowerSoil®土壤*1-24250 mg20 µg per filter30分鐘
PowerSoil®-htp 96孔*96-384250 mg20 µg per well不到1天(384個樣品)
PowerMax®土壤DNA大量提取試劑盒1-2410 g1 mg per filter30分鐘
UltraClean®土壤*1-241 g20 µg per filter30分鐘
UltraClean®-htp 96孔土壤*96-384250 mg20 µg per well不到1天(384個樣品)
UltraClean®大量土壤*1-820 g1 mg per filter50 分鐘
 
水樣的DNA提取
MO BIO為水樣中的DNA提取提供了三種試劑盒:Ultra、Rapid和Power。Ultra和Power的區(qū)別同樣是入門級和強力級之差,而Rapid則顧名思義,快,它能夠在15分鐘之內快速提取不渾濁水樣中的DNA。
首先,通過試劑盒提供的0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾水樣。當然,如果你自己有濾膜的話,也可以購買不帶濾膜的試劑盒。這種醋酸纖維素膜是安裝在一個過濾杯中的,可輕松取出,立即使用或留待后用。過濾捕獲到微生物后,將濾膜放入管中,此管中還含有微珠、微珠溶液和裂解液。通過化學和機械作用力裂解微生物,并通過震蕩器的機械作用裂解細胞。之后,釋放出的DNA與硅膠膜結合,洗滌后回收。
若是不渾濁的水樣,可選擇RapidWater™ 快速水樣*,改進過的裂解和結合技術提高了低生物量樣品的DNA產量。若是渾濁且復雜的水樣,可選擇PowerWater® *。它是新一代的從各種水樣中提取DNA的試劑盒,采用了IRT技術,即使水樣中含有大量的污染物,也能夠成功提取出高產量和高質量的DNA。若居于兩者之間,那么UltraClean® 水樣*更適合。它可在35分鐘內提取水中微生物的DNA,得到的高質量DNA(50kb以上)可應用于PCR、限制性酶切消化以及其它應用。
水樣*的選擇指南:
名稱通量樣品量結合能力處理時間
PowerWater® *1-4100ml-數L20 µg per filter20分鐘
RapidWater™ 快速水樣*1-4100ml-數L20 µg per filter14分鐘
UltraClean® 水樣*1-10100ml-數L1 mg per filter35分鐘
 
生物膜的DNA提取
許多微生物粘附在胞外多聚物(EPS)上,形成了生物膜。在EPS基質上,還發(fā)現了很多化合物,包括腐植酸、金屬、鹽和農藥。因此,生物膜上的微生物很難裂解,而核酸,即使提取出來,仍含有大量抑制劑。過去也有一些從生物膜中提取核酸的方法,但通常需要數小時甚至數天才能完成。
為此,MO BIO推出了PowerBiofilm™ 生物膜*。它將生物膜預處理,并改善了細胞裂解,再加上的抑制劑去除技術,帶來了高質量且無抑制劑的DNA。對于生物膜的核酸純化而言,zui困難的一步恐怕要算微生物的*裂解。若想裂解,必須降解EPS。怎么降解呢?方法不外乎幾種:化學法、機械法和酶法。PowerBiofilm試劑盒利用這幾種方法的組合來降解EPS,讓微生物*暴露在裂解液中。之后使用微珠、標準裂解液和裂解增強液,確保微生物群落的*裂解。
不過,裂解是裂解了,還不能高興地太早,降解的EPS及其他化合物仍會殘留,抑制核酸的下游應用。為了防止這一點,PowerBiofilm試劑盒使用的IRT技術去除腐植物質、多糖和多酚。通過這幾步組合拳,生物膜中的DNA總算是順利提取出來,且拋開了惱人的抑制劑。
據MO BIO公司介紹,由于環(huán)境和生物樣本的復雜性,他們很多客戶都會同時備有PowerSoil、PowerWater和Biofilm等試劑盒,在遇到復雜樣本時會分別試用,找出的那一個。若您現在還在為復雜樣本而苦惱,那希望MO BIO的一系列試劑盒能為您帶來一縷清風,讓您從容面對各種復雜樣本,且獲得滿意的結果。不知道選哪個?


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