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上海哈靈生物科技有限公司
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全組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒說明書
2022-11-15 閱讀(155)
全組織琥珀酸脫氫酶（SDH）活性染色試劑是一種旨在使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過反應(yīng)系統(tǒng)的作用，組織樣本中酶活性部位呈現(xiàn)出藍(lán)黑色沉淀現(xiàn)象而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種動(dòng)物組織樣品琥珀酸脫氫酶的活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，顯色清晰。
琥珀酸脫氫酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環(huán)（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素，位于線粒體內(nèi)膜，參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個(gè)單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生延胡索酸（furmarate），通過黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理，使用人工電子受體染料硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的電子，而被還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)色或藍(lán)黑色甲暨色素。據(jù)此證明組織細(xì)胞琥珀酸脫氫酶的活性。
保存染色液（Reagent B）和反應(yīng)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取2.7毫升染色液（Reagent B）到新的15毫升錐形離心管，加入300微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
1． 準(zhǔn)備1個(gè)6孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2． 放進(jìn)新鮮切除的動(dòng)物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長(zhǎng)；如果過大，最好刀切處理一下）
3． 將組織壓平
4． 小心加入3毫升清理液（Reagent A），浸沒整個(gè)組織
5． 小心抽去清理液（Reagent A）
6． 小心加入3毫升染色工作液，浸沒整個(gè)組織
7． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
8． 小心抽去染色工作液
9． 小心加入3毫升清理液（Reagent A），浸沒整個(gè)組織
10． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
11． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次
12． 小心加入3毫升固著液（Reagent D），浸沒整個(gè)組織
13． 室溫下孵育15分鐘
14． 小心抽去固著液（Reagent D）
15． 小心加入3毫升清理液（Reagent A），浸沒整個(gè)組織
16． 小心抽去清理液（Reagent A）
17． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟15至16二次
18． 后續(xù)石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）
19． 在光學(xué)顯微鏡下觀察：表達(dá)琥珀酸脫氫酶的組織細(xì)胞為陽性組織細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)黑色。
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為10次操作
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 用戶根據(jù)實(shí)際需求，按比例配制試劑用量
4． 反應(yīng)液（Reagent C）避免反復(fù)凍融
5． 陰性對(duì)照時(shí)，染色工作液不含有反應(yīng)液（Reagent C）
6． 可以使用50毫摩爾丙二酸鈉（Sodium malonate）作為抑制劑
7． 整個(gè)操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
8． 染色孵育時(shí)間，根據(jù)樣品和酶活性強(qiáng)弱調(diào)整，通常為5至30分鐘
9． 全組織染色存在其染色不均勻、組織內(nèi)部染色滲透困難等局限
10． 樣品染色后保存，避免光照
11． 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰
