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上海哈靈生物科技有限公司
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RPMI-1640培養(yǎng)基的制備以及說明
2013-11-19 閱讀(4114)
在實驗中我們經(jīng)常會用到RPMI-1640培養(yǎng)基，但遺憾的是關(guān)于RPMI-1640培養(yǎng)基卻很少有人仔細(xì)研究。RPMI-1640培養(yǎng)基是RoswellParkMemorialInstitute的縮寫，代指洛斯維，1640則是培養(yǎng)基代號。其中含有10%胎牛血清。
實驗中使用的RPMI-1640培養(yǎng)基通常都需要自己配制。而配制過程中需要注意到很多細(xì)節(jié)，否則就會影響到RPMI-1640培養(yǎng)基的效果?？偨Y(jié)一下關(guān)于RPMI1640培養(yǎng)基的需知，可分為以下幾點：
1.配制培養(yǎng)基新制備的三蒸水（即經(jīng)過三次蒸餾收集的水，一般多用于，生物和醫(yī)療上的檢驗）是*選擇。一般在試驗前當(dāng)天制備，前一天也可。注：調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配制。
2.培養(yǎng)液（配制方法不仔細(xì)介紹，自己可查）配好后，先抽取少許放入培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于37℃溫箱內(nèi)24～48hr，用以檢測培養(yǎng)液是否有污染。
3.溶解培養(yǎng)基，過程為將干粉培養(yǎng)基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內(nèi)面兩次，再倒入培養(yǎng)液中，振蕩即可。注：一般不要加熱助溶。
4.補加試劑，即是根據(jù)包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等試劑。
5.加抗生素，一般青霉素終濃度為100U/ml，鏈霉素為100U/ml。但市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，所以每一升培養(yǎng)液中加0.5ml即可。市售鏈霉素則為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，所以每一升培養(yǎng)液中也加0.5ml即可。注：無鏈霉素的情況下，也可用慶大霉素代替，終濃度調(diào)為50～200U/ml即可。
6.調(diào)pH值，培養(yǎng)基中加水到900ml（在需要加10%小牛血清的情況下），然后用5%NaHCO3調(diào)節(jié)pH到7.2為止。
7.過濾除菌：zui宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，可保證過濾的效果。注：濾膜正面（即是光面）要朝上。過濾后分裝于小瓶中（100或200ml）。
8.每次配液，都需要的其他輔助性液體（例如Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同時配制，分別再過濾。
9.每次配液量以兩周左右為zui宜，一次配液不可太多，太多則會造成營養(yǎng)成分（主要為谷氨酰胺）的損失，zui后造成實驗繁瑣或者污染。
10.zui后，必須注意制備培養(yǎng)基的器皿清洗要干凈，烤干后備用（濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養(yǎng)基的小瓶等存放和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基液體的器具都應(yīng)進(jìn)行滅菌）。
注意：RPMI-1640培養(yǎng)基中需加入10%的小牛血清。關(guān)于小牛血清加入的注意事項不做仔細(xì)介紹，自己可查。培養(yǎng)基的配制過程及其注意事項大家都已清楚，但僅是清楚還并不足夠，我們更多的要動手去做。實踐不僅是檢驗真理惟一標(biāo)準(zhǔn)，更是檢驗一個人的標(biāo)準(zhǔn)。
實驗中使用的RPMI-1640培養(yǎng)基通常都需要自己配制。而配制過程中需要注意到很多細(xì)節(jié)，否則就會影響到RPMI-1640培養(yǎng)基的效果?？偨Y(jié)一下關(guān)于RPMI1640培養(yǎng)基的需知，可分為以下幾點：
1.配制培養(yǎng)基新制備的三蒸水（即經(jīng)過三次蒸餾收集的水，一般多用于，生物和醫(yī)療上的檢驗）是*選擇。一般在試驗前當(dāng)天制備，前一天也可。注：調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配制。
2.培養(yǎng)液（配制方法不仔細(xì)介紹，自己可查）配好后，先抽取少許放入培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于37℃溫箱內(nèi)24～48hr，用以檢測培養(yǎng)液是否有污染。
3.溶解培養(yǎng)基，過程為將干粉培養(yǎng)基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內(nèi)面兩次，再倒入培養(yǎng)液中，振蕩即可。注：一般不要加熱助溶。
4.補加試劑，即是根據(jù)包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等試劑。
5.加抗生素，一般青霉素終濃度為100U/ml，鏈霉素為100U/ml。但市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，所以每一升培養(yǎng)液中加0.5ml即可。市售鏈霉素則為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，所以每一升培養(yǎng)液中也加0.5ml即可。注：無鏈霉素的情況下，也可用慶大霉素代替，終濃度調(diào)為50～200U/ml即可。
6.調(diào)pH值，培養(yǎng)基中加水到900ml（在需要加10%小牛血清的情況下），然后用5%NaHCO3調(diào)節(jié)pH到7.2為止。
7.過濾除菌：zui宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，可保證過濾的效果。注：濾膜正面（即是光面）要朝上。過濾后分裝于小瓶中（100或200ml）。
8.每次配液，都需要的其他輔助性液體（例如Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同時配制，分別再過濾。
9.每次配液量以兩周左右為zui宜，一次配液不可太多，太多則會造成營養(yǎng)成分（主要為谷氨酰胺）的損失，zui后造成實驗繁瑣或者污染。
10.zui后，必須注意制備培養(yǎng)基的器皿清洗要干凈，烤干后備用（濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養(yǎng)基的小瓶等存放和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基液體的器具都應(yīng)進(jìn)行滅菌）。
注意：RPMI-1640培養(yǎng)基中需加入10%的小牛血清。關(guān)于小牛血清加入的注意事項不做仔細(xì)介紹，自己可查。培養(yǎng)基的配制過程及其注意事項大家都已清楚，但僅是清楚還并不足夠，我們更多的要動手去做。實踐不僅是檢驗真理惟一標(biāo)準(zhǔn)，更是檢驗一個人的標(biāo)準(zhǔn)。
