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上海哈靈生物科技有限公司
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吖啶橙染色液說明書
2015-5-27 閱讀(1030)
簡(jiǎn)介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。哈靈生物吖啶橙染色液(1mg/ml)為儲(chǔ)存液，使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。
規(guī)格：10ml 保存條件：4℃ 避光
操作步驟(僅供參考)：
1、 收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用PBS清洗細(xì)胞1次，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié) 細(xì)胞濃度至106/ml。
2、 取適量的細(xì)胞懸液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，輕輕混勻。
3、 室溫避光染色15～20ml，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。
4、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)488nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)515nm)，計(jì)數(shù)并拍照。
染色結(jié)果：正常細(xì)胞 細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒
注意事項(xiàng)：
1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨(dú)使用。
2、吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
3、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。
4、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
