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哈靈生物實(shí)驗(yàn)室——中檢所標(biāo)準(zhǔn)說核酸分子雜交
2015-6-8 閱讀(1141)
哈靈生物實(shí)驗(yàn)室——中檢所標(biāo)準(zhǔn)說核酸分子雜交
核酸分子雜交是核酸研究中一項(xiàng)zui基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，互補(bǔ)的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對(duì)形成穩(wěn)定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的，可以根據(jù)所使用的探針已知序列進(jìn)行特異性的靶序列檢測。其基本原理就是應(yīng)用核酸分子的變性和復(fù)性的性質(zhì)，使來源不同的脫氧核糖核酸片段，按堿基互補(bǔ)關(guān)系形成雜交雙鏈分子。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間，也可在RNA與DNA鏈之間形成。使雙螺旋解開成為單鏈，因此，變性技術(shù)也是核酸雜交的一個(gè)環(huán)節(jié)。
雜交的雙方
是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對(duì)象可以是克隆化的基因組DNA，也可以是細(xì)胞總DNA或總RNA。根據(jù)使用的方法被檢測的核酸可以是提純的，也可以在細(xì)胞內(nèi)雜交，即細(xì)胞原位雜交。探針必須經(jīng)過標(biāo)記，以便示蹤和檢測。使用zui普遍的探針標(biāo)記物是同位素，但由于同位素的安全性，近年來發(fā)展了許多非同位素標(biāo)記探針的方法。
技術(shù)應(yīng)用
核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性，因而該技術(shù)在分子生物學(xué)領(lǐng)域中已廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學(xué)領(lǐng)域中具有廣泛地應(yīng)用，而且在臨床診斷上的應(yīng)用也日趨增多。在醫(yī)學(xué)上，目前已用于多種遺傳性疾病的基因診斷，惡性腫瘤的基因分析，傳染病病原體的檢測等領(lǐng)域中，其成果大大促進(jìn)了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的進(jìn)步和發(fā)展。
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