 |
上海哈靈生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA代測服務,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒,ELISA試劑盒說明書,大鼠ELISA試劑盒 |
聯(lián)系電話
18918128223
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 何經(jīng)理
- 電話：
- 手機：
- 18918128223
- 傳真：
- 86-021-51010234
- 地址：
- 國定東路200號
- 郵編：
- 200433
- 網(wǎng)址：
- www.halingbio.com/
血清是細胞培養(yǎng)中Z重要的元素之一
2015-6-29 閱讀(593)
血清是細胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。因此，我特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題，供大家參考：
1. 保存血清的方法?我們建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?，再放回冷凍?br>2. 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質量受損?我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
5. 有必要做熱滅活嗎?實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作: ? 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。? 解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。? 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。? 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。? 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
8. Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差別?Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清執(zhí)行的所有的標準檢驗程序，,除了這些標準檢測，Certified胎牛血清還有一些附加的檢測：zui終內毒素含量的檢測噬菌體檢驗生物化學檢測激素的檢測血紅蛋白檢測Sf9 細胞生長促進及方法學檢測
9. 如何評估ES細胞合格的胎牛血清?使用D3 ES細胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進、生長抑制和分化因子非常敏感的細胞系。相關生長效率分析：當ES細胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長培養(yǎng)基中，檢測啟動和支持ES細胞克隆的能力。細胞毒分析：當以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長培養(yǎng)基中，檢測ES細胞和feeder細胞的生長能力。相關形態(tài)學和分化分析：檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅，分化的細胞較大，豐滿，顏色較淺。所有的分析在沒有ESGRO的情況下進行，培養(yǎng)基中出現(xiàn)ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導致的問題。（ESGRO或LIF經(jīng)常用來保持ES細胞處于未分化狀態(tài)。）培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)大約8批血清中有1批可以用來培養(yǎng)ES細胞。
