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上海哈靈生物科技有限公司
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一氧化氮（NO）試劑盒說明書
2015-8-17 閱讀(1674)
貨號HL012 硝酸還原酶法）
一、測定意義：
NO化學(xué)性質(zhì)活潑，體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽（NO3）、血清（NO3）與（NO3）濃度之和（NO3＋NO2）才能準(zhǔn)確代表體內(nèi)NO水平。血清（NO3+NO2)含量測定，國內(nèi)有的單位采用金屬鎘還原法，但該法操作繁瑣（血清需除蛋白），反映不易控制（金屬鎘可將NO2進(jìn)一步還原），且不能*講NO3還原為NO2，準(zhǔn)確差。
本測試法為一種靈敏、簡便、快速、穩(wěn)定、易推廣的方法。
二、測定原理：
NO化學(xué)性質(zhì)活潑，在體內(nèi)代謝很快轉(zhuǎn)為NO2和NO3，而NO2又進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為NO3，本法利用硝酸還原酶特異性將NO3還原為NO2，通過顯色深淺測定其濃度的高低。
三、試劑的組成和配制（50T/48樣）：
試劑一：液體6mlX2瓶，-20℃以下保存3個月。用前放37℃水浴或室溫使溶解后再用。
試劑二：液體6mlX2瓶，-20℃以下保存3個月。用前放37℃水浴或室溫使溶解后再用。
混合試劑的配制：按試劑一：試劑二=1：1配制，用多少配多少，配好后充分混合后
待用，現(xiàn)用現(xiàn)配24小時內(nèi)有效。
試劑三：液體12mlX1瓶，室溫保存6個月。
試劑四：液體6mlX1瓶，室溫保存6個月。
試劑五：粉劑X1支，用時加90℃~100℃熱雙蒸水20ml【注1】充分溶解，避光保存。
試劑六：粉劑X1支，用時加雙蒸水8ml，避光冷藏保存，當(dāng)顏色變成深咖啡色不可在用。
試劑七：液體8mlX1瓶，室溫保存6個月
顯色劑的配制：需都少配多少。試劑五：試劑六：試劑七=2.5：1：1.若能在一個月
內(nèi)用完者也可一次配成。剩余顯色劑置于盛雙蒸水的40ml方瓶中，避光保存。天冷
會有結(jié)晶析出，再次使用時，放100℃水浴，反復(fù)搖動溶解后使用。
10mmol/L標(biāo)準(zhǔn)品貯備液：0.5mlX1支，-20℃以下保存6個月。
100μmol/L 標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：取0.1ml 10 mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)品貯備液用雙蒸水定容稀
另附：配試劑五、試劑六及標(biāo)準(zhǔn)品的雙蒸水40mlX2瓶。
【注1】：試劑五為過抱和溶液，所以在配制時用90℃~100℃的熱雙蒸水23ml（熱脹冷縮）邊隔水加熱邊用玻璃棒攪拌，以使其充分溶解。一次實驗用不完再用時可能仍有結(jié)晶，用之前可以再次邊隔水加熱邊玻璃棒攪拌使其溶解。（隔水加熱；取干凈的小燒杯倒入試劑五，再加入90℃~100℃的熱雙蒸水23ml，再將此小燒杯放在另一有熱水的盆或鍋或燒杯中，注意千萬別把小燒杯中的試劑弄翻。這時用玻璃棒將小燒杯中的試劑攪拌溶解，試劑五溶液一次實驗用不完再用時可能仍有結(jié)晶，用之前盛有試劑五溶液的小燒杯放在另一有任誰的盆或鍋或燒杯中，注意千萬別把小燒杯中的試劑弄翻。這時用玻璃棒將小燒杯中的試劑攪拌溶解。）
- 試劑的組成和配制（25管/24樣）：
試劑一：液體6mlX1瓶，-20℃以下保存3個月。用前放37℃水浴或室溫使溶解后再用。
試劑二：液體6mlX1瓶，-20℃以下保存3個月。用前放37℃水浴或室溫使其溶解后再用。
混合試劑的配制：按試劑一：試劑二=1：1配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，現(xiàn)用現(xiàn)配24小時內(nèi)有效。
試劑三：液體6mlX1瓶，室溫保存6個月。
試劑四：液體3mlX1瓶，室溫保存6個月。
試劑五：粉劑X1支，用時加90℃~100℃熱雙蒸水10ml【注2】充分溶解。避光保存。
試劑六：粉劑X1支，用時加雙蒸水4ml，避光冷藏保存，當(dāng)顏色變成深咖啡色不可再用。
試劑七：液體4mlX1瓶,室溫保存6個月。
顯色劑的配制；需多少配多少。試劑5：試劑六：試劑七=2.5：1：1.若能在一個月
冷會有結(jié)晶析出，再次使用時，放100℃水浴，反復(fù)搖動溶解后使用。
10mmol/L標(biāo)準(zhǔn)貯備液：0.5mlX1支，-20℃以下保存6個月。
100μmol/L標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：取0.1ml 10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)品貯備液用雙蒸水定容稀釋至10ml(即100倍稀釋），混勻，即為100μmol/L標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
另附：配試劑五、試劑六及標(biāo)準(zhǔn)品的雙蒸水40mlX1瓶。
【注】：試劑五為過飽和溶液，所以在配置時用90℃~100℃的熱雙蒸水13ml（熱脹冷縮）邊隔水加熱邊用玻璃棒攪拌使其充分溶解。一次實驗用不完再用時可能仍有結(jié)晶，用之前可以再次邊隔水加熱邊玻璃棒攪拌使其溶解。（隔水加熱；取干凈的小燒杯倒入試劑五，再加入90℃~100℃的熱雙蒸水13ml，再將此小燒杯放在另一有熱水的盆或鍋或燒杯中，注意千萬別把小燒杯中的試劑弄翻。這時用玻璃棒將小燒杯中的試劑攪拌溶解，試劑五溶液一次實驗用不完再用時可能仍有結(jié)晶，用之前把盛有試劑五溶液的小燒杯放在另一有熱水的盆或鍋或燒杯中，注意千萬別把小燒杯中的試劑弄翻。這時用玻璃棒將小燒杯中的試劑攪拌溶解。）
五、操作步驟：
（一）、血清、胃液、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液等標(biāo)本的檢測前處理。請參照《實驗方法學(xué)》：
- 操作表：
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 | |
雙蒸水（ml） | 0.1 | ||
100μmol/L標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液（ml） | |||
樣本（ml） | |||
混合試劑（ml） | 0.4 | 0.4 | 0.4 |
混勻，37℃準(zhǔn)確水浴60分鐘
試劑三（ml） | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
試劑四（ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
充分旋窩混勻30秒，室溫靜置40分鐘，3500~4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清顯色。
上清（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
顯色劑（ml） | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
混勻，室溫靜置10分鐘，波長550nm，光徑0.5cm，雙蒸水凋零，測定各管吸光度值。
注意點：1、冬天測試時，所有的試劑均應(yīng)置于37℃預(yù)熱5分鐘。
2、取上清時，如果上清量不夠，請延長離心時間，或者少取一點。例如：可取0.4或0.45ml，但您同一批實驗所有的管子都應(yīng)取上清的量要一致，千萬不可將沉淀吸上。
