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10058.1 v.A
細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)菌污染定性熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)菌污染定性熒光檢測試劑盒是一種旨在通過特異性核酸熒光染料使活體細(xì)菌立刻染色，呈現(xiàn)點(diǎn)
狀或桿狀等綠色熒光的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人
體和動物細(xì)胞培養(yǎng)中革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌的定性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，檢測敏感，
熒光清晰。
技術(shù)背景
細(xì)胞培養(yǎng)中的主要微生物污染包括支原體（mycoplasma）、細(xì)菌、真菌、酵母和病毒等。在含有抗生素的培
養(yǎng)液中，低水平的細(xì)菌污染則難以觀察和發(fā)現(xiàn)。SYTO-9染料為一種自由穿透質(zhì)膜，并特異性結(jié)合核酸的熒
光染料，一旦結(jié)合，呈現(xiàn)強(qiáng)力的綠色熒光。細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)菌污染定性熒光染色技術(shù)，通過SYTO-9對細(xì)菌核酸
的染色，替代細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)，具有快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)菌的存在，在熒光顯微鏡下（激發(fā)波長485nm，
散發(fā)波長500nm）下觀察到綠色點(diǎn)狀（dots）或桿狀（rods）。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
稀釋液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存在-20℃冰箱里，避免光照；有效保證6 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器
載玻片和蓋玻片：用于樣品染色的載體
臺式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞操作
細(xì)胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿：用于培養(yǎng)細(xì)胞的容器
熒光顯微鏡：用于觀察熒光染色
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，將-20 的試劑置于室溫下凍融。然后移取xx 微升染色液（Reagent B）到1.5 毫升離心管，加
入xx 微升稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，放進(jìn)暗室里備用。
一、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)檢測
1． 準(zhǔn)備好待測細(xì)胞培養(yǎng)至50％鋪滿率
2． 小心移取5 毫升細(xì)胞培養(yǎng)容器里的培養(yǎng)液到15 毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心15 分鐘，速度為1000g
4． 小心抽掉上清液
5． 加入xx 毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
6． 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心15 分鐘，速度為1000g
7． 小心抽掉上清液
8． 加入xx 微升清理液（Reagent A），混勻
9． 移取20 微升混勻液到潔凈的載玻片上
10．放進(jìn)37 培養(yǎng)箱孵育10 分鐘，使其晾干
11．快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
12．加上xx 微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
13．室溫下孵育5 分鐘
14．小心抽去清理液
15．加上xx 微升染色工作液在載玻片上，蓋上蓋玻片
16．在室溫下，暗室里孵育5 分鐘
17．（選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
18．（選擇步驟）小心加上xx 微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
19．（選擇步驟）小心抽去清理液
20．封片處理
21．置于熒光顯微鏡下觀察染色（400 至1000 倍放大倍數(shù)）：激發(fā)波長485nm，散發(fā)波長500nm
胞漿內(nèi)或細(xì)胞外呈現(xiàn)點(diǎn)狀、桿狀、散粒、纖絲狀等綠色熒光
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)檢測
1． 將待測懸浮細(xì)胞（1 X 105 總量）移入到15 毫升錐形離心管
2． 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心15 分鐘，速度為1000g
3． 小心抽去上清液
4． 加入xx 毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
5． 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5 分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽去上清液
7． 加入xx 微升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
8． 移取20 微升混勻液到潔凈的載玻片上
9． 放進(jìn)37 培養(yǎng)箱孵育10 分鐘，使其晾干
10．快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
11．加上50 微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
12．室溫下孵育5 分鐘
13．小心抽去清理液
14．加上xx 微升染色工作液在載玻片上，蓋上蓋玻片
15．在室溫下，暗室里孵育5 分鐘
16．（選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
17．（選擇步驟）小心加上xx 微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
18．（選擇步驟）小心抽去清理液
19．封片處理
20．置于熒光顯微鏡下觀察染色（400 至1000 倍放大倍數(shù)）：激發(fā)波長485nm，散發(fā)波長500nm
胞漿內(nèi)或細(xì)胞外呈現(xiàn)點(diǎn)狀、桿狀、散粒、纖絲狀等綠色熒光
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為20 次操作
2． 操作時須戴手套
3． 操作時，嚴(yán)格無菌操作
4． 染色時，避免光照
5． 細(xì)胞染色前后的清洗過程中，小心操作
6． 陽性圖像可見綠色發(fā)亮的細(xì)小點(diǎn)狀、桿狀等染色；標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌染色見下圖：
7． 如果有真菌和酵母污染，可見較大的胞體染色
8． 如果為細(xì)胞碎片，可見不規(guī)則染色
9． 本公司提供系列細(xì)胞培養(yǎng)污染檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰