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上海哈靈生物科技有限公司
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組織肉毒堿棕櫚酰轉移酶總活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
2017-6-12 閱讀(859)
主要用途
組織肉毒堿棕櫚酰轉移酶（CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE）總活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過肉堿和脂酰輔酶A反應系統(tǒng)中釋放出巰基輔酶A，使用Ellman試劑后，產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化，即采用比色法來測定組織裂解樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品（動物、人體等）肉毒堿棕櫚酰轉移酶的總活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
技術背景
脂肪酸β氧化過程（β-oxidation）在動物組織的線粒體發(fā)生的脂肪酸代謝通路，可概括為活化、轉移、β氧化及zui后經(jīng)三羧酸循環(huán)被*氧化生成CO2和H2O，并釋放能量等四個階段。大于10個碳（C10）的活化型長鏈脂酰輔酶A是不能直接透過線粒體內(nèi)膜，需要借助肉堿（camitine），即L-3羥-4-*基銨丁酸，而被轉運入線粒體內(nèi)，在線粒體內(nèi)膜的外側及內(nèi)側分別有肉堿脂酰轉移酶（carnitine palmitoyl transferase；CPT；EC2.3.1.21）I和Ⅱ。位于內(nèi)膜外側的酶Ⅰ，促進脂酰CoA轉化為脂酰肉堿，后者可借助線粒體內(nèi)膜上的轉位酶（或載體），轉運到內(nèi)膜內(nèi)側，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉堿釋放肉堿到胞漿，留下脂酰CoA。由此位于胞漿的活化脂肪酸―脂酰CoA穿過線粒體內(nèi)膜進入基質(zhì)而被氧化分解。肉堿脂酰轉移酶缺失癥導致機體無法代謝脂肪酸。基于肉堿和脂酰輔酶A在肉堿脂酰轉移酶的作用下，產(chǎn)生脂酰肉堿，并釋放出巰基輔酶A（CoA-SH），與Ellman試劑5,5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸）[5,5,-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反應后，產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通過其吸收峰值的變化（412nm波長），來定量分析肉堿脂酰轉移酶的總活性。
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
臺式離心機：用于樣品操作
比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度儀或酶標儀：用于比色分析
注意事項
1．本產(chǎn)品為20次（比色皿）和80次（96孔板）操作
2．操作時，須戴手套
3．建議使用純化線粒體（10微克）作為待測樣品為佳
4．建議使用比色皿測定
5．樣品須澄清，至關重要
6．加樣后3秒內(nèi)比色測定
7．測定值由低到高變化；測定可持續(xù)15分鐘
8．比色測定后，比色皿須清洗*
9．樣本測定15分鐘讀數(shù)高于0分鐘讀數(shù)表明具有酶活性
10．如果待測樣本為總蛋白，其蛋白濃度為100微克/50微升（本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）
11．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
12．肉毒堿棕櫚酰轉移酶單位活性定義為：在25℃，pH 7.4條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾輔酶A所需的酶量作為一個活性單位
13．本公司提供系列脂肪酸代謝檢測試劑產(chǎn)品
