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主要用途

細(xì)菌總ATP酶活性酶連續(xù)反應(yīng)光譜法定量檢測試劑是一種旨在使用ATP酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng)，測定ATP水解產(chǎn)生的ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng)， 即采用光譜法測定其氧化后峰值（NADH濃度）的變化，以此進(jìn)行測算單位酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞ATP酶的總活性檢測。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測敏感。

技術(shù)背景

腺苷三磷酸酶，又稱為ATP酶（adenosine triphosphatase；ATPase或ATP phosphohydrolase；EC3.6.1.3），屬于磷酸水解酶，可以催化含磷的酸酐分解，即催化三磷酸腺苷分解為二磷酸腺苷和無機(jī)磷。ATP酶的去磷酸化反應(yīng)釋放出能量，成為細(xì)胞生命代謝的能源。ATP酶為跨膜蛋白（transmembrane），幫助傳輸各種代謝分子進(jìn)出細(xì)胞。根據(jù)ATP酶的結(jié)構(gòu)和功能，分為五類不同的ATP酶，即F、V、A、P和E型。F型，又稱為F1F0型，主要在線粒體、葉綠體或細(xì)菌細(xì)胞膜上，進(jìn)行氧化磷酸化或光合作用；P型，又稱為E1E2 型，存在于細(xì)菌和真核細(xì)胞膜和細(xì)胞器上，其功能在于水解ATP獲得能量，跨膜運(yùn)輸各種化學(xué)分子，包括Ca2+傳輸性、Na+-K+ /H+-K+傳輸性、H+傳輸性和所有細(xì)菌型等。V型，又稱為V1V0型，主要存在于真核細(xì)胞的液泡（vacuole）中。A型，又稱為A1A0型，存在于古生菌（archaea）中。E型，為細(xì)胞表面的酶。基于底物ATP， 受到各種組織細(xì)胞中的 ATP酶的水解，進(jìn)而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，由還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），所產(chǎn)生的峰值變化（340nm），來定量分析ATP酶的總活性。

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
（微型）臺式離心機(jī)：用于樣品操作
恒溫?fù)u床：用于細(xì)菌培養(yǎng)
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
比色皿：用于光譜分析的容器
分光光度儀：用于光譜分析

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為20次操作，包括背景對照
2．操作時(shí)，須戴手套
3．系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1次
4．建議樣品忌用磷酸緩沖溶液 
5．如果測定初期，背景對照吸光讀數(shù)不穩(wěn)定，表明體系均衡溫度不理想，建議樣品加入前孵育由3分鐘延長至5分鐘
6．加入樣品啟動(dòng)反映后3秒內(nèi)即刻光度測定
7．反應(yīng)測定值由高到低變化；測定可以持續(xù)20分鐘
8．測定值由高到低變化，即0分鐘測定讀數(shù)高于10分鐘或20分鐘測定讀數(shù)，表明有酶活性
9．光譜測定后，比色皿須清洗*
10．建議待測樣本蛋白濃度為100微克/50微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量；注意計(jì)算公式的調(diào)整（本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1）
11．ATP酶活性單位濃度定義：在37℃溫度下，pH 7.5條件下，每分鐘內(nèi)能夠氧化1微摩爾還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作為一個(gè)活性單位
12．本公司提供系列ATP酶類技術(shù)產(chǎn)品 
 
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測準(zhǔn)確