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菌種保存培養(yǎng)基 北京低*

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更新時間:2016-05-16 20:26:38瀏覽次數(shù):785次

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菌種保存培養(yǎng)基

 

菌種保存培養(yǎng)基

中文名 菌種保存培養(yǎng)基
英文名 Strain Store Medium
用途 用于常用細菌斜面?zhèn)鞔笆覝乇4?/td>
配方(g/L) 蛋白胨 牛肉浸粉 氯化鈉 * 瓊脂 pH值7.5±0.1 10.0 5.0 3.0 2.0 4.5 25℃
原理 蛋白胨、牛肉浸粉提供氮源,維生素,生長因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;*作為緩沖劑;瓊脂是凝固劑。
用法 稱取本品24.5g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝于螺旋蓋試管內(nèi)的3/4左右高度, 121℃高壓滅菌15分鐘,備用。
質(zhì)量控制 在36±1℃培養(yǎng)18-24小時。 質(zhì)控菌株 菌株編號 生長情況 其它特征 * ATCC25923 +++ 有黃色色素 化膿性鏈球菌 ATCC12344 +++ 無色透明小菌落 單增李斯特氏菌 ATCC19114 +++ 無色透明小菌落 大腸埃希氏菌 ATCC25922 +++ 無色透明大菌落 沙門氏菌 ATCC14028 +++ 無色大菌落 銅綠假單胞菌 CMCC10104 +++ 有綠色色素 蠟樣芽孢桿菌 ATCC11778 +++ 白色不規(guī)則菌落

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培實驗操作方法
  3.1 藥敏片法
  3.1.1 在超凈臺中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌,以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密,直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或PBS調(diào)到0.5個麥氏標準再涂布均勻。)
  3.1.2 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停,取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼,可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結(jié)果,要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上;一般可在平皿*貼一片,外周可等距離貼若干片(外周一般可貼七片),每種藥敏片的名稱要記住。
  3.1.3 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后,觀察效果。
  3.2 牛津杯法  
 3.2.1 在超凈臺中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌,以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。)
  3.2.2 以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管(內(nèi)徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養(yǎng)基上,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙,并在小管處標記各種藥物名稱。每個平板可放4-6支小管。待分鐘后,分別向各小管中滴加一定數(shù)量的各種藥液,勿使其外溢。置37℃培養(yǎng)8-18小時,觀察結(jié)果。
  3.2.3 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后,觀察效果。
  3.3 打孔法:
  該法較簡單,成本低,易操作,比較適用于商品藥物的檢測。
  3.3.1 在超凈臺中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌,以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。)
  3.3.2 以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管(外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養(yǎng)基上打孔,將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出,并以火焰封底,使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合(以防藥液滲漏,影響結(jié)果)。
  3.3.3 加樣:按不同藥液加樣,樣品加至滿而不溢為止。
  3.3.4 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后,觀察效果。

 

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