培養(yǎng)基研究在化學與生物學制備的方法
1)自溶法:將新鮮的生物材料存放于一定的pH和適當?shù)臏囟认拢毎Y構在自身所具有的各種水解酶(如蛋白酶和酯酶等)的作用下發(fā)生溶解,使細胞內含物釋放出來,此法稱為自溶法。使用時要特別小心操作,因為水解酶不僅可以使細胞壁和膜破壞,同時也可能會把某些要提取的有效成分分解了。
2)溶脹法:培養(yǎng)基細胞膜為天然的半透膜,在低滲溶液和低濃度的稀鹽溶液中,由于存在滲透壓差,溶劑分子大量進入細胞,將細胞膜脹破釋放出細胞內含物。
3)酶解法:利用各種水解酶,如*、纖維素酶、蝸牛酶和酯酶等,于37℃,pH8,處理15分鐘,可以專一性地將細胞壁分解,釋放出細胞內含物,此法適用于多種微生物。例如從某些細菌細胞提取質粒DNA時,可采用*(來自蛋清)破細胞壁,而在破酵母細胞時,常采用蝸牛酶(來自蝸牛),將酵母細胞懸于0.1mmol/L檸檬酸一*緩沖液(pH=5.4)中,加1%蝸牛酶,在30℃處理30分鐘,即可使大部分細胞壁破裂,如同時加入0.2%疏基乙醇效果會更好。此法可以與研磨法聯(lián)合使用。
4)有機溶劑處理法:利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶劑或SDS(十二烷基硫酸鈉)等表面活性劑處理細胞,可將細胞膜溶解,從而使培養(yǎng)基細胞破裂,此法也可以與研磨法聯(lián)合使用。