MGC80-3胃癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)MGC80-3胃癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-AMinonapthelene 3,6,8 trisulfonic acid disodiuM 8-氨基萘-1,3,6-三磺酸 117-42-0
1,3,5-Benzenetricarboxaldehyde 均苯*醛 3163-76-6
1g 38588-64-6
1,3,5-Benzenetrisulfonic acid trisodiuM salt 43052-65-9
SURAMIN 145-63-1
1,3,5-TriaMinobenzene trihydrochloride 1,3,5-三氨基苯 108-72-5
1,3,5-TriaMinobenzene trihydrochloride 1,3,5-三氨基苯鹽酸鹽 638-09-5
1,3,5-Triazatricyclo[3.3.1.13,7]decan-2-aMine(9CI) 115519-84-1
tetrahydro-1,3,5-triazin-2(1H)-one 7098-14-8
1,3,5-Triazine 1,3,5-三嗪 290-87-9
1,3,5-TRIAZINE-2,4,6-TRIAMINE, POLYMER WITH FORMALDEHYDE, METHYLATED 1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺與甲醛和甲縮醛的聚合物 68002-20-0
1,3,5-triazine-2,4,6-triyltrinitrilohexaMethanol 531-18-0
Teroxirone 1,3,5-三縮水ganyou-S-三嗪三酮 2451-62-9
1,3,5-Tri-O-acetyl-2-deoxy-D-erythro-pentofuranose 1,3,5-三乙酰基-2-脫氧-D-赤式戊呋喃糖 4594-52-9
1,3,5-Tris(3-broMophenyl)benzene 1,3,5-三(3-溴苯基)苯 96761-85-2
1,3,6,8-Pyrenetetrasulfonic acid tetrasodiuM salt 1,3,6,8-芘四碳酸四鈉鹽 59572-10-0
1,3,6,8-Pyrenetetrasulphonic acid 6528-53-6
1,3,6-HEXANETRICARBONITRILE 1,3,6-己烷三腈 1772-25-4
1,3,6-Octatriene,3,7-diMethyl-, (3Z)- ferric aMMoniuM oxalate 羅勒烯 異構(gòu)體混合物 3338-55-4
POLY(M-XYLYLENEDIAMINE-ALT-EPICHLOROHYDRIN), DIAMINE TERMINATED 135470-04-1
4-(4,6-Diphenyl-1,3,5-triazin-2-yl)benzene-1,3-diol 38369-95-8
1,3-Benzenediol,4-pentadecyl- 16825-54-0
1,3-Benzodioxol-4-aMine,6-Methoxy-(9CI) 6-甲氧基-4-氨基-1,3-苯并二氧戊環(huán) 401811-81-2
1,3-Benzodioxole-5-ethanaMine 3,4-亞甲二氧* 1484-85-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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