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上海廣銳生物科技有限公司

小鼠白三烯D4(LTD4)說明書

時(shí)間:2014-3-10閱讀:535
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  應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠白三烯D4(LTD4)水平。用純化的小鼠白三烯D4(LTD4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白三烯D4(LTD4),再與HRP標(biāo)記的白三烯D4(LTD4)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白三烯D4(LTD4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠白三烯D4(LTD4)濃度。
  
  小鼠白三烯D4(LTD4)說明書
  
  試劑盒組成48孔配置
  
  說明書1份
  
  封板膜2片(48)
  
  密封袋1個(gè)
  
  酶標(biāo)包被板1×48
  
  標(biāo)準(zhǔn)品:2700ng/L0.5ml×1瓶
  
  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
  
  酶標(biāo)試劑3ml×1瓶
  
  樣品稀釋液3ml×1瓶
  
  顯色劑A液3ml×1瓶
  
  小鼠白三烯D4(LTD4)說明書
  
  5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
  
  6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
  
  7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
  
  操作步驟
  
  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1800ng/L,1200ng/L,600ng/L,300ng/L,150ng/L)。
  
  小鼠白三烯D4(LTD4)說明書
  
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