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人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR)實(shí)驗(yàn)原理

時間:2014-6-23閱讀:746
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人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR)實(shí)驗(yàn)原理

實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR)水平。用
純化的人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的
微孔中依次加入葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR),再與HRP 標(biāo)記的葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白
(GCKRR)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。
TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD
值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GCKRR)含量。

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3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30(48T 的20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T 的20 倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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