人乳頭狀瘤病毒18 抗體 酶聯(lián)免疫技術  廣銳生物-國內(nèi)高、優(yōu)Elisa試劑盒供應商

采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中人乳頭狀瘤病毒18 抗體
(HPV18-Ab）。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中乳頭狀瘤病毒18 抗體
(HPV18-Ab）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗原結合，
形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光
度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人乳頭狀瘤病毒18 抗體(HPV18-Ab）
的存在與否。

人乳頭狀瘤病毒18 抗體 酶聯(lián)免疫技術

酶標包被板1×48 1×96 2-8℃保存
陰性對照0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
陽性對照0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

人乳頭狀瘤病毒18 抗體 酶聯(lián)免疫技術

操作步驟：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml 后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為乳頭狀瘤病毒18 抗體(HPV18-Ab）
陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為乳頭狀瘤病毒18 抗體(HPV18-Ab）
陽性