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上海創(chuàng)祥生物科技有限公司


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山羊P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA Kit 原理

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號48T/96T

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

聯(lián)系方式:王萍查看聯(lián)系方式

更新時間:2017-05-21 22:34:33瀏覽次數(shù):472次

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產(chǎn)品簡介

山羊P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA Kit 原理上海創(chuàng)祥生物科技有限公司是國內(nèi)主要供應商之一,公司代理了不同品牌價格檔次的ELISA試劑盒。數(shù)萬種抗體 耗材 試劑等, 品種多,質(zhì)量好,靈敏度高,價格實惠,可免費提供代測服務(為您節(jié)省時間)

詳細介紹

山羊P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA Kit  原理


 ELISA方法說明
ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比小鼠血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒
較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
ELISA檢測試劑盒組成:
1:濃縮洗滌液(50ml)20x
2.標本稀釋液(12ml)
3.終止液(12ml)
4.標準品(2管)
5.酶標抗體稀釋液體(12ml)
6.*抗體稀釋液(12ml)
7.包被酶標板一塊
8.坐標紙一張
9.封板紙一張
樣品類型(SAMPLETYPES):
標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
操作步驟
1.    標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為9U/L,6U/L,3U/L,1.5U/L,0.75U/L)。
2.    加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.    配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.    溫育:操作同3。
8.    洗滌:操作同5。
9.    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.    測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
注意事項:
1.    試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.    濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.    各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4.    請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.    底物請避光保存。
7.    嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.    所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.    本試劑不同批號組分不得混用
樣品采集:
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮?,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加*。
備注:以上為ELISA試劑盒通用說明書,不包括特別的試劑盒,具體的請參照每個產(chǎn)品的說明書

 

 

關鍵詞:酶標儀

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